第8章 紫外可见吸光光度法及分子荧光分析法汇总.ppt

8.4.2 显色条件的确定 c(R) c(R) 1. 显色剂用量（c(M)、pH一定） Mo(SCN)32+ 浅红 Mo(SCN)5 橙红 Mo(SCN)6- 浅红 Fe(SCN)n3-n c(R) 2. 显色反应酸度（c(M)、 c(R)一定） pH1pHpH2 pH 邻二氮菲－亚铁反应完全度与pH的关系 H+ H+ A c(R)≈[R′]=10-4 mol·L-1 β3＝1021.3 β3 FeR3 OH- Fe2++3R pH3～8为适宜 的酸度范围 25℃ 50℃ t /min A 3. 显色温度及显色时间 (c(M)， c(R)， pH一定) 另外，还有介质条件、有机溶剂、表面活性剂等. 8.4.3 测定中的干扰以及消除方法 Co2+, Fe3+ Co2+ FeF63- Co(SCN)2 (蓝) ⑴NaF SCN－ Co2+ Fe2+,Sn4+ (2)Sn2+ Co(SCN)2 SCN－ 测Co2＋ :(掩蔽法) 1.化学法 Co2+, Zn2+, Ni2+, Fe2+ CoR,ZnR NiR,FeR CoR, Zn2+ , Ni2+ , Fe2+ 钴试剂R H+ 测Co2＋ :(生成络合物性质不同) 消除干扰，也可采取分离法. Fe3+, Cu2+ FeSSal（紫红） Cu2+ pH= 2.5 SSal 测Fe3＋:(控制pH) 2. 物理法—选择适当的测定波长 515 655 415 500 钍-偶氮砷III 钴-亚硝基红盐 A A 络合物 络合物 试剂 试剂 ?/nm ?/nm (1) 仅络合物有吸收，溶剂作参比. 如 phen-Fe2+ 标准曲线 (2) 待测液也有吸收，被测液作参比. 如 测汽水中的 Fe (3) 显色剂或其他试剂也有吸收，空白溶液作参比 例:邻二氮菲光度法测Li2CO3中的 Fe， 参比溶液为不含Li2CO3样品的所有试剂. (4) 干扰组分与显色剂有反应,又无法掩蔽消除时： 1）掩蔽被测组分，再加入显色剂,作参比. 2）加入等量干扰组分到空白溶液中,作参比. 3.选择适当的参比溶液 8.5 吸光光度法的应用 8.5.1 单一组分的测定 1. 金属离子: Fe-phen, Ni-丁二酮肟, Co-钴试剂 2. 磷的测定: DNA中含P～9.2%, RNA中含P～9.5%, 可得核酸量. H3PO4+12(NH4)2MoO4+21HNO3 =(NH4)3PO4·12MoO3+12NH4NO3+12H2O 磷钼黄(?小) 磷钼(V)蓝(?大) Sn2+ 3. 蛋白质测定: 溴甲酚绿、考马斯亮蓝等 4. 氨基酸测定: 茚三酮(紫色化合物) 5. 水质检测: NH4+、NO2-、Mn2+、Fe2+、SO42-、Hg2+等 6. 药物含量测定: 比吸光系数定量；荷移光谱法测定 7. 紫外吸收(UV): NO2-、NO3-、SO42-、SO32-、CO32-、SCN-、酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋白质等 8.5.2 多组分的测定 ?xl1, eyl1, exl2, eyl2由x,y标液 在?1, ?2处分别测得. 在?1处测组分x, 在?2处测组分y. b) 在?1处测组分x; 在?2处测总吸收,扣除x吸收,可求y. c) x,y组分不能直接测定 A1=exl1bcx+ eyl1bcy(在?1处测得A1) A2 =exl2bcx+ eyl2bcy(在?2处测得A2) 8.5.3 光度滴定 NaOH滴定 对硝基酚 pKa=7.15 间硝基酚 pKa=8.39 ? pKa=1.24 V1 V2 V(NaOH)/mL 对硝基酚 间硝基酚 酸形均无色. 碱形均黄色 典型的光度滴定曲线 依据滴定过程中溶液吸光度变化来确定终点的滴定分析方法. Vsp 滴定剂吸收 Vsp 被滴物吸收 Vsp 滴定剂与待测物均吸收 Vsp 产物吸收 8.5.4 络合物组成的测定 1. 摩尔比法: 固定cM ,改变cR 1:1 3:1 c(R)/c(M) A 1.0 2.0 3,0 2. 等摩尔连续变化法: M:R=1:1 0.5 0.33 cM/c cM/c M:R=1:2 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 8.5.5 一元弱酸离解常数的测定