罗丹明6G在不同溶剂中的偏振发光特性测试.PDF

Application 罗丹明 6G 在不同溶剂中的偏振发光特性测试 前言 荧光偏振法是法国人 Perrin 于 1926 年第一次报道的，是在 1970 年代后期广泛应用于生物化 学研究。荧光偏振法是用偏振光照射在样品上，根据检测得到的荧光所拥有什么样的偏振光来得到 分子的旋转运动或溶剂粘度等信息。任何物质都处于不断运动当中，液态环境中的荧光分子也不例 外。因此当受到偏振光激发时，荧光分子的运动状态例如旋转、翻转、相互结合、排斥、溶液的粘 度、温度等这些因素都有可能对这个荧光因子受激发后发出的偏振光的性质产生影响。因此，对其 进行分析比较，有可能揭开物质活动的内在规律，达到研究“荧光偏振”的目的。近年来，以这种物 理学现象为基础的技术在生命科学研究的多个领域中扮演着越来越重要的角色。 当荧光分子受平面偏振光激发时，如果分子在受激发时期保持静止，发射光将位于同样的偏振 平面。如果在受激发时期，分子旋转或翻转偏离这一平面，发射光将位于与激发光不同的偏振面。 如果用垂直的偏振光激发荧光素，可以在垂直的和水平的偏振平面检测发射光光强 ( 发射光从垂直 平面偏向水平平面的程度与荧光素标记的分子的迁移率有关 )。如果分子很大，激发时发生的运动 极小，发射光偏振程度较高。如果分子小， 分子旋转或翻转速度快，发射光相对于激发光平面将 去偏振化。 在荧光偏振测量系统中，激发光束被偏光器偏光后照射到样品上。在样品的荧光分子中，只有 与偏光器一个方向的分子会发出荧光。发射的荧光根据入射偏振角分别地检测平行和垂直组分。分 子的偏振特性通常用荧光偏振度 P 和各向异性来进行计算，计算过程中需要考虑仪器自身校正因子 G ，计算内容如下表所示： 偏光角度 Signal 激发 发射 I∥ (平行组分) 0° 0° I (垂直组分) 0° 90° i∥ (平行组分) 90° 90° i (垂直组分) 90° 0° （1）仪器常数的计算(G 因子) ： i G   i ∥ （2）荧光偏光角度的计算(P 值) ： I - I G P ∥  I  I G ∥  （3）荧光各向异性的计算(A 值) ： I - I G A  ∥  I  2I G ∥  通常，分子在环境中的运动越慢，分子的偏振特性越明显，这与分子自身结构（分子量、刚性 等）以及所处环境（溶剂粘度、温度）等都有关系。 测试条件 仪器：FL970 荧光分光光度计、偏振测试附件 测试参数：测量方式：波长扫描；Ex 波长：488 nm；Em 波长：530 nm-620 nm ；扫描速度：60 nm/min；采样间隔：1 nm；Ex 带宽