甘蔗细胞壁转化酶基因SoCIN1克隆及其在转基因-南方农业学报.PDF

南方农业学报 JournalofSouthernAgriculture 2017，48（10）：1727-1733 ·1727· 10期 ISSN2095-1191；CODENNNXAAB DO ：10.3969/j.issn.2095-1191.2017.10.01 甘蔗细胞壁转化酶基因（SoCIN1）克隆及其在 转基因烟草中的表达特性分析 1，2 1，2 2 ，3 2 ，3* 2 ，3* 牛俊奇 ，苗小荣 ，王露蓉 ，杨丽涛 ，李杨瑞 1 2 （玉林师范学院 生物与制药学院，广西 玉林 537000 ；广西大学 农学院/亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室， 3 南宁 530005 ； 中国农业科学院 甘蔗研究中心/广西农业科学院 甘蔗研究所/农业部广西甘蔗生物技术与遗传改良重点实验室/ 广西甘蔗遗传改良重点实验室，南宁 530007） 摘要：【目的】克隆甘蔗细胞壁转化酶基因（SoCIN1）并分析其在转基因烟草植株中的表达特性，为研究CIN1基因 功能提供参考。【方法】克隆SoCIN1基因，利用基因重组技术构建植物正义表达载体pBI 121-SoCIN1 ，采用叶盘法经农 杆菌EHA 105介导将其转化烟草品种K346。经抗性筛选和PCR扩增验证后获得转SoCIN1基因烟草植株，采用半定量 PCR检测叶片SoCIN1基因的表达量，并测定叶片可溶性糖含量、CIN活性及株高（以野生型烟草为对照）。【结果】克隆 获得的SoCIN1基因长度为1731 bp ，与GenBank 已公布的SoCIN1基因（JQ312298）核苷酸序列同源性达100% ，并通过 构建其植物正义表达载体转化烟草。PCR扩增鉴定结果表明，SoCIN1基因已整合至烟草基因组DNA 。对F 和F 代进 0 1 行转基因烟草连续筛选，获得4个转SoCIN1基因烟草株系（T- 1、T-2 、T-3和T-4 ）。在4个株系的叶片中均检测到SoCIN1 基因的表达，其中以在T- 1株系叶片中SoCIN1基因表达量最高，其次是T-3株系，最低的是T-4株系。4个株系叶片的可 溶性糖含量、CIN活性及株高均高于野生型烟草，其中CIN活性显著高于野生型烟草（P0.05 ，下同），且T- 1株系CIN活 性高于其他3株系；T- 1、T-2和T-3株系叶片可溶性糖含量分别显著高于野生型烟草39.68%、19.95%和31.15% ；T- 1、T-2 、 T-3和T-4株系的株高较野生型烟草分别提高了15.57%、2.90%、5.74%和5.22% ，但仅T- 1株系与野生型烟草存在极显著 差异（P0.01 ）。【结论】转SoCIN1基因烟草叶片过表达SoCIN1基因，能提高烟草的CIN活性和可溶性糖含量，促进植株 生长，由此推测该基因在甘蔗生长发育和蔗糖积累过程发挥作用。 关键词：甘蔗；细胞壁转化酶（CIN1）；基因克隆；表达特性；可溶性糖；株高 中图分类号：S566.103 文献标志码：A 文章编