黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究-中国药理学通报.PDFVIP

·６７０· 中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１０Ｍａｙ；２６（５）：６７０～３ 黄芪甲苷对体外神经干细胞增殖作用影响的研究 １ １ １ １ ２ １ 柴丽娟 ，钟佩茹 ，周志焕 ，王秀云 ，石田寅夫 ，张艳军 （１．天津中医药大学，天津市中药药理学重点实验室，天津　３００１９３； ２．铃鹿医疗科学大学东洋医学研究所，日本 铃鹿市　５１００２９３） 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ２８４．１；Ｒ３２２．８；Ｒ３２９．２４ 开发对 ＮＳＣｓ具有保护效能的治疗药物、探索神经 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１０）０５－０６７０－０４ 系统疾病新的治疗方法奠定基础。 摘要：目的　探讨黄芪甲苷（ａｓｔｒａｇａｌｏｓｉｄｅ，ＡＳ）对神经干细胞 １　材料与方法 增殖的影响。方法　体外培养大鼠胎鼠神经干细胞，Ｎｅｓｔｉｎ １．１　材料　孕 １６ｄＳＤ大鼠（荣屋理化，日本）； 免疫化学染色鉴定 ＮＳＣｓ，ＢｒｄＵ标记鉴定 ＮＳＣｓ增殖。ＢｒｄＵ ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１∶１）（Ｈｙｃｌｏｎｅ，ＵＳＡ）；Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ，ＣＡ， 标记免疫细胞化学染色检测神经干细胞增殖能力。实时定 ＵＳＡ）；ｂＦＧＦ（ＰｒｏＳｐｅｃＴａｎｙ，Ｒｅｈｏｖｏｔ，Ｉｓｒａｅｌ）；ＥＧＦ 量 ＰＣＲ技术探讨黄芪甲苷促进 ＮＳＣｓ增殖的作用机制。结 果　Ｎｅｓｔｉｎ鉴定为阳性，Ｂｒｄｕ标记亦呈阳性；ＢｒｄＵ标记结果 （Ｓｔｒａｔｈｍａｎｎ，Ｈａｎｎｏｖｅｒ，Ｇｅｒｍａｎｙ）；Ｎｅｓｔｉｎ小鼠单克 表明，黄芪甲苷高、中、低剂量组ＮＳＣｓ的增殖率明显提高（Ｐ 隆抗体 （ＳａｎｔａＣｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ）；ＢｒｄＵ（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒ ＜００５，Ｐ＜００１）。实时定量ＰＣＲ结果表明在诱导ＮＳＣｓ增 ｍａｎｙ）；ＢｒｄＵ小鼠单克隆抗体（Ｓｉｇｍａ，Ｇｅｒｍａｎｙ）； 殖过程中，黄芪甲苷高剂量组 Ｈｅｓ５基因表达增加（Ｐ＜ ＡＢＣ试剂盒（ｍｏｕｓｅ，ＩｇＧ）和 ＤＡＢ试剂盒（Ｖｅｃｔｏｒ， ００５）。结论　黄芪甲苷对 ＮＳＣｓ增殖具有明显的诱导作  Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）；ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ ＭｏｕｎｔｉｎｇＭｅｄｉｕｍ 用，其可能通过上调与细胞增殖相关基因Ｈｅｓ１、Ｈｅｓ５、ｃｙｃｌｉｎ  （Ｖｅｃｔｏｒ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）；ＴＲＩｚｏｌＲｅａｇｅｎｔｓ（Ｉｎｖｉｔｒｏ Ｄ１表达而起作用，但也可能调节与其它增殖通路有关。 ｇｅｎ，Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ，Ｃａｎａｄａ），ＴａｑＭａｎＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎ ｓｃｒｉｐｔａｓｅＲｅａｇｅｎｔｓ（ＡＢＩ，ＵＳＡ）；ＳＹＢＲＧｒｅｅｎＰＣＲ 关键词：神经干细胞；黄芪甲苷；增殖；Ｈｅｓ１；Ｈｅｓ５；ｃｙｃｌｉｎＤ１ ＭａｓｔｅｒＭｉｘ试剂盒（ＡＢＩ，ＵＫ）；引物（Ｓｉｇｍａ）；黄芪甲 　　利用神经干细胞（ｎｅｕｒｏｎｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＮＳＣｓ）具有 苷（天津中一制药，天津）；ＣＫ３０倒置显微镜（Ｏｌｙｍ 分化神经元和胶质细胞的多向分化潜能和修复损生 ｐｕｓ，Ｊａｐａｎ）；ＡＢＩＰＲＩＳＭ７０００定量 ＰＣＲ仪（ＡＢＩ， 组织的能力，来防治由于细胞缺失或损伤引起的多 ＵＳＡ）；ＤＰ５０成像