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2019-04-08 发布于天津
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Sep．2008 生物加工过程第6卷第5期 ·44· ChineseJournalofBioprocessEngineering 2008年9月 Pseudomonasutida p S1海藻糖合成酶表达质粒的构建及诱导条件优化姚林，段作营，史仲平，毛忠贵 (江南大学工业生物技术教育部重点实验室，无锡214122) 摘要：采用PCR方法从PseudomonasputidaSI中克隆出编码海藻糖合成酶的基因treS，并与质粒pQE30T相连，构 coli 建了表达质粒pQE-TS2。将此重组质粒转化宿主茵EM15进行诱导表达。十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶 SDS—PAGE电泳结果表明，treS基因在大肠杆菌中获得了高效表达。通过对诱导温度、诱导荆浓度、加诱导荆时间 mmoL／L，20℃诱导20 和诱导时间的优化研究，在茵液生长至OD咖值为0．6时，加入诱导剂IPTG至终浓度O．01 h，蛋白的表达量达到每克干细胞89mg的蛋白，粗酶液酶活达到19U／mL。关键词：Pseudomona5put／da；海藻糖合成酶；克隆；表达；诱导条件中图分类号：Q93 文献标志码：A 文章编号：1672—3678(2008)05—0044—06 ConstructionofPseudomonasSl trehalose putida synthaseexpression vectorand ofinductionconditions optimization YAO Lin，DUANZuo—ying，SHI Zhong-gui Zhong—ping，MAO ofIndustrial ofthe of of (KeyLaboratory BiotechnologyMinistryEducation，SchoolBiotechnology． JiangnanUniversity，Wuxi214122，China) Abstract：TreS trehalose fromPseudomonasS1was PCRand geneencoding synthase putida amplifiedby Was to as M15 cells the were ligatedpQE30Tplasmid pQE—TS2．E．colicompetent expressionplasmid the trehalose transformedrecombinant andinducedIPTG．The Was by s