动物细胞培养和核移植技术(第一课时).pptVIP

2.2 动物细胞工程 2.2 动物细胞工程 生产单克隆抗体 常用技术手段 动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞工程常用的技术手段技术： 第一课时 皮肤烧伤，如果创面很小（不大于硬币）只要保持清洁，甚至深度烧伤，也可能自愈。如果下层真皮受损面积较大，常常需要植皮。植皮需要的健康皮片。植皮需要的健康皮片，可以取自烧伤病人自身未烧伤的部位（自体植皮），也可取自其他活人或尸体（异体植皮）等。自体植皮是永久性的，取自其他人或动物的植皮是暂时性的，是在创面愈合过程中为保护创面而采取的措施，10～14天后就要被身体排斥。 如果一个大面积烧伤的病人来说，自体皮肤有限，其他渠道的皮肤来源不足。如何才能获得大量的自体健康皮肤？ 动物细胞培养技术 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 一、动物细胞培养 1 、动物细胞培养的概念： 细胞增殖 2 、动物细胞培养的原理： 3 、动物细胞培养的过程： 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞 （幼龄动物的器官组织；动物胚胎） 动物细胞培养过程 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 （1）思考：为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？ ①单个细胞容易和周围环境进行物质交换——获得营养物质、氧气等，排出代谢废物； ②分散成单个细胞培养能使细胞水平操作的其他技术得以实现 。 （2）胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 P44 1.进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。 不能用胃蛋白代替（最适PH不同） 几个常考概念 ①、细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易 于贴附。 ②、细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 ③、原代培养： 将动物组织消化后的初次培养。 ④、传代培养： 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 如何界定原代培养和传代培养？ 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 ⑴原代培养: 将动物组织消化后的初次培养。 ⑵传代培养: 对贴满瓶壁的细胞用胰蛋白酶处理，然后再分瓶继续培养。 无菌无毒环境、充足营养（血清或血浆）、适宜温度、PH、气体环境。 4、体外培养动物细胞需要物质和环境条件： ⑴无菌、无毒的环境 ①对培养液、培养用具进行无菌处理； ②在培养液中加抗生素； ③定期更换培养液。 ⑵充的营足养 葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、 微量元素、血浆或血清 为什么要加血清呢？ ⑶温度和PH ： 36.5±0.5℃ ；PH = 7.2―7.4 ⑷气体环境——O2和CO2 C02的主要作用是维持培养液的PH。 含 95% 空气加 5% CO2 混合气体 5、动物细胞培养技术的应用： 1、大规模的生产生物制品。 2、培养的动物细胞作为基因工程的受体细胞。 3、检测判断物质的毒性。 4、培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等方面的研究，如用于 等，为 及其他疾病提供理论依据。 筛选抗癌药物 治疗和预防癌症 资料一： 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 资料二： 人工关节——软骨再生 1.第一次手术: 从病人关节软骨中未 受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。 2.分离软骨细胞并经三星期的体外 培养，使细胞数增加约10～20倍。 3.第二次手术: 清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。 资料三： 结果: 经过复健一年后即可恢复正常的生活。 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞