鱼类营养生理实验精选课件.pptVIP

（５）计算。 样品含氮量（％）＝（样品滴定值－空白滴定值）×c×n １ ０００×ＶD Ｖ×１００ m 样品粗蛋白含量（％）＝样品含氮量×６２５ 式中，c为标准酸液的物质的量浓度（moｌ／Ｌ）； n为氮原子的摩尔质量（１４）； ＶD为样品消化后定容体积（ｍＬ）； Ｖ为用于测定的消化液体积（ｍＬ）； m为样品质量（g）。 坚持 鱼类对饵料主要成分消化吸收率的测定 ——放射性同位素１４C标记测定法 了解养殖鱼类对饵料中某种成分的消化吸收和代谢的特点；掌握应用放射性同位素对饵料成分进行标记和测定鱼类对饵料某种成分消化吸收率的基本方法。 应用放射性同位素标记饵料中的某种成分，然后分离提取该成分并制成颗粒饵料投喂鱼类，分别测定鱼体内和饵料中的放射性活度。由于鱼体内的放射性活度能反映鱼对所摄食饵料某种成分的消化吸收量，因而，对比饵料中的总放射性活度和鱼体中的总放射性活度，就可计算鱼对饵料中某种成分的消化吸收率。本实验着重介绍草鱼对放射性同位素１４C标记粗纤维的消化吸收情况。采用本实验技术和方法可以测定其他种鱼类对饵料其他成分的消化吸收情况。 坚持 四、实验步骤 （一）放射性同位素１４C标记粗纤维的制备 纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，它由许多β－葡萄糖单位所组成。获得天然的放射性糖类最常用的方法是把绿色植物叶子放在含有放射性二氧化碳的空气中进行光合作用。所以，要得到放射性纤维亦要通过植物进行光合作用，在体内合成放射性的同化产物，然后用化学方法分离和提纯。 为此，采用Na２１４CO３和高氯酸作用产生１４CO２，并选择吸收１４CＯ２合成有机物能力较强的凤眼莲幼嫩植株作为进行光合作用的植物材料。 坚持 本实验采用密闭系统使植物在含有１４CO２的空气中进行光合作用。使用的仪器和方法如下（见图２－１）： （１）电动单向打气泵。 （２）放射性二氧化碳反应瓶。其中瓶１装１ moｌ／Ｌ高氯酸１５～２０ ｍＬ，并加入几滴甲基红作为指示剂，瓶２装Na２１４CO３ １００ μCi（３７×１０６Ｂq），瓶３为安全瓶。 （３）叶室：（a）为钟罩形玻璃罩（容积约为４ ０００ ｍＬ），作为光合作用叶室，其顶端有进出气孔；（b）为有孔的有机玻璃板，每株凤眼莲插在有机玻璃板上；（c）为盛水的玻璃缸，凤眼莲根部浸入其中，使植株处于正常生理状态。 （４）回收瓶：其中瓶１′为缓冲瓶，瓶２′和瓶３′盛过量的NaOH溶液。 坚持 （二）１４C标记粗纤维的提取 称取２０ g １４C标记的凤眼莲干粉置于３ ０００ ｍＬ大烧杯中，加入２ ０００ ｍＬ １２５ ｍＬ／Ｌ H２SO４，加热煮沸，同时加入数滴辛醇溶液，以防止气泡过多，并注意水分蒸发。不断用滴管加入沸水，使烧杯内溶液保持在２ ０００ ｍＬ左右。持续沸腾３０ min后趁热倒入布氏漏斗中抽滤。抽滤毕，用沸水洗２～３次，每次用水约４００～８００ ｍＬ。洗至滤渣不呈酸性为止。再用２　０００ ｍＬ １２５ g／Ｌ NaOH溶液把漏斗内的滤渣洗回原大烧杯中，并依法进行碱处理。碱处理后，滤渣用沸水洗至不呈碱性；用煮沸的１２５ ｍＬ／Ｌ H２SO４ ４００ ｍＬ分为２～３次洗滤渣，以除去溶于酸中的某些金属沉淀，接着用沸水分数次洗去残余硫酸直至不呈酸性为止。最后，用１００ ｍＬ ９５０ ｍＬ／Ｌ乙醇洗滤渣，再用２００ ｍＬ乙醚分两次滤洗，所得的滤渣就是粗纤维，将它置于１０５ ℃烘箱中烘干备用。 提取的粗纤维的抽样用常规生化分析方法试验，证实与粗纤维共存于凤眼莲植物体中的蛋白质、脂肪、糖类等物质均已清除。 坚持 鱼类营养生理实验技术 坚持 主要内容 鱼类蛋白质利用率的测定 鱼类对饵料主要成分消化吸收率的测定 鱼类肠管对氨基酸的吸收 坚持 鱼类蛋白质利用率的测定 了解鱼类蛋白质利用率测定的基本原理，掌握鱼类蛋白质利用率的测定方法。 食物中蛋白质的利用主要取决于它们所含有的必需氨基酸状况。食物蛋白质越是能够满足鱼类对必需氨基酸的需要，它的利用率就越高。对蛋白质营养价值的评价，目前比较普遍采用的测定与计算方法之一是蛋白质净利用率rNPU（ＮＰＵ：Net protein utilization）： ｍＩ－（ｍF－ｍFK）－（ｍU－ｍUK） ｍＩ rNPU＝ 式中，ｍＩ为摄入的总氮量；ｍF和ｍU分别为投喂试验饵料的鱼粪便（feces）和尿液（urine）中所含的氮量；ｍFK和ｍUK分别为投喂无蛋白饵料的鱼粪便和尿液中所含的氮量，即内源性氮的失去量。 坚持 鱼类蛋白质利用率的测定 （一）实验装置的建立 ①养鱼水族箱（A），体积可为３５ ｃｍ×２０ ｃｍ×３０ ｃｍ。每次只容纳１尾鱼进行试验。水族箱应和水源（E）相连接并不断用气泵（D）充