课件：李善刚《医学实验动物学》9第六章 动物模型和免疫缺陷动物.ppt

* * * 2．幽门螺杆菌感染动物模型(animal model of he licobaeter pylori infection) (1) Hp感染悉生小猎狗模型 给予106～109cfu的Hp菌液经口感染悉生猎狗，组织学检查胃粘膜可见局灶性或弥漫性淋巴细胞浸润和淋巴滤泡形成，并伴有轻至中度中性粒细胞和嗜酸性粒细胞的浸润，与人的胃炎相似，中性粒细胞是持续存在的，而在悉生小猪则是短暂存在。人和猪的Hp感染通常局限在胃内，而在小狗除胃以外，在胃肠道其他部位如咽部、食管、十二指肠、空肠、结肠也检出Hp。 (2) Hp感染家猪模型 实验猪在实验前经检查无Hp存在。经西咪替丁抑酸处理后给予Hp口服感染，每天3次，每次3ml(1.5×108 cfu/m1)共4d，可在胃窦和胃体检测到Hp，并产生与人类组织学相同的慢性活动性胃炎。 (3) Hp感染小鼠模型 109cfu的Hp菌液经口感染无特异病原CD1小鼠、BALB/c小鼠和普通级CD1小鼠，1周后及其后的4～8周内，小鼠体内可查到程度不同的感染，其胃粘膜的病理变化与人感染Hp的变化相似，主要表现为胃腺体消失，上皮细胞脱落，溃疡形成及粘膜固有层炎性细胞浸润。此模型可用于观察Hp感染的病理过程及细菌疫苗应用的研究。 3．消化性溃疡动物模型(animal model of peptlculcer) (1) 应激性大鼠溃疡模型 大鼠禁食24h，将动物固定于特制木板上，垂直浸入(23±0.5)℃水浴中，水深平剑突，24h后取出，脱颈处死，打开腹腔，结扎胃贲门和幽门，胃内注入1％甲醛溶液8ml，将胃取出浸入甲醛溶液中，30min后沿胃大弯剖开，测量每个溃疡长径，计算全胃溃疡长径之和为溃疡指数。此模型方法简便，成功率高，可用于应激性溃疡发生机制和粘膜保护药物的研究。 (2) 组胺性大鼠溃疡模型 大鼠禁食24h，腹部皮下注射磷酸组胺50mg/kg，1h后再重复注射一次，2h后处死动物，按前述方法固定胃和记录溃疡指数。此方法可同时诱发食管、胃、十二指肠等发生溃疡。可用于溃疡发生机制及治疗药物的研究。 (3) 水杨酸性大鼠胃溃疡模型 大鼠禁食24h，灌胃给水杨酸100mg/kg体重，4h后脱颈处死，按前述方法固定胃，在普通放大镜下计数腺胃出现的溃疡点数目，以出血点个数作为观察指标。 (4) 利血平性小鼠溃疡模型 小鼠腹部皮下注射利血平5mg/kg体重，继续禁食18h，脱颈处死，解剖取胃，固定标本，用解剖显微镜计数胃溃疡个数。 4. 溃疡性结肠炎动物模型 (animal model of ulcerative colitis) (1) 大鼠乙酸溃疡性结肠炎模型 乙酸属有机酸，与肠粘膜接触可直接导致炎症损伤。选用雄性SD大鼠，体重300～350g，试验前禁食16h，戊巴比妥钠腹腔麻醉。用导管经肛门插入结肠内8cm，注入8％乙酸2ml，20s后立即注入5ml生理盐水冲洗。其病理特点为结肠粘膜弥漫性充血水肿，炎性细胞浸润，出现糜烂，严重者可见溃疡形成。但早期仅见单纯急性炎症，病变进展及愈合均迅速。与人类溃疡性结肠炎病变进展与愈合交替的特点不同，该模型炎性介质代谢与人类溃疡性结肠炎相似。其优点为制模简便、重复性好、经济实用，但不能反映人类溃疡性结肠炎免疫学变化。 (2) 聚糖硫酸钠诱发小鼠急慢性溃疡性结肠炎 选无特定病原菌CBA/J(H-2k)或BALB/c(H-2d)雄性小鼠，8～9周龄。饮水中给予5％～10％葡聚糖硫酸钠(DSS)饮用8～9d，即可看到结肠粘膜炎细胞浸润、多发性糜烂、隐窝脓肿等急性炎症表现。慢性溃疡性结肠炎模型可先给予5％DDS饮用7d，再饮用自来水10d，如此3～5个循环，结肠粘膜不仅有糜烂、炎细胞浸润，且有淋巴滤泡形成及粘膜再生改变，部分粘膜出现异型增生，此模型病理改变类似于人类溃疡性结肠炎模型，不仅可用于发病机制、治疗药物研究，而且适用于与结肠癌相关的研究。 (3) 免疫学方法诱发大鼠溃疡性结肠炎模型 选用Wistar大鼠，体重120～130g。取一只健康大鼠的结肠内容物，划线于伊红-美蓝平板，37℃培养24h，取典型菌落扩增并做数值鉴定，确定为大肠杆菌后，冰箱保存备用。免疫前取菌种扩增，用福尔马林杀死细菌，生理盐水洗两次并调浓度为1.2×108/ml。免疫动物分别于第1，10，17，24d共接受4次免疫。第1次于后足跖处注射细菌悬液0.2m1；第2、3次分别于腹部和背部皮下多点注射0.4ml和0.6ml；第4次腹腔内注射1.2ml。结肠病理改变可见粘膜水肿、炎细胞浸润及血管炎