鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA检测方法的建立-微生物学报.PDF

微生物学通报 Nov. 20, 2015, 42(11): 2260−2269 Microbiology China © 2015 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ DOI: 10.13344/j.microbiol.china.150397 生物实验室 鸭疫里氏杆菌多种血清型间接ELISA 检测方法的建立 1,2∆ 1∆ 1 1 1 1 1 1* 季慕寅 王晴 翟志鹏 陈绵绵 马彩凤 姚火春 陆承平 张炜 (1. 南京农业大学 动物医学院 江苏 南京 210095) (2. 芜湖职业技术学院 生物工程学院 安徽 芜湖 241003) 摘 要：【目的】鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer ，RA)是一种重要的禽病病原，分为21 个 血清型。但一直缺乏一种针对多种血清型广泛适用的抗体检测方法。前期的研究表明，外膜蛋白 A (Outer membrane protein A ，OmpA)广泛存在于多种血清型的RA 菌株中，是一种重要的免疫原 性蛋白，并且其基因序列在RA 血清型之间具有高度的保守性，提示其可以作为RA 感染血清抗 体检测的靶点分子。以重组蛋白OmpA 建立间接酶联免疫吸附试验检测RA 的抗体。【方法】通 过诱导表达条件的摸索及蛋白纯化，获得适用于ELISA 包被的重组OmpA 抗原。通过Western-blot 证明重组蛋白OmpA 是否与RA 多种血清型发生免疫学反应。进行方阵试验以确定ELISA 抗原 的最佳包被浓度、被检测血清的反应浓度。重复性、特异性和敏感性试验检查该方法的实用性。 【结果】实验证实加入1% 乙醇的诱导培养基有利于重组蛋白的可溶性表达。Western-blot 结果表 明，重组蛋白OmpA 可以与1、2 、6、10、11、13、14 和17 型多种RA 主要流行血清型有良好 的免疫反应性。经方阵试验确定抗原的最佳包被浓度为8 mg/L，待检血清的最佳稀释度为 1:160。 所建立检测方法具有良好的重复性、特异性和敏感性。【结论】实验建立的鸭疫里氏杆菌多种血 清型间接ELISA 检测方法可以用于免疫后抗体消长以及感染性抗体的检测。 关键词：鸭疫里氏杆菌，外膜蛋白A ，多血清型，间接酶联免疫吸附试验 Development of indirect ELISA for detecting antibodies against multi-serotypes of Riemerella anatipestifer JI Mu-Yin1,2∆ WANG Qing1∆ ZHAI Zhi-Peng1 CHEN Mian-Mian1 MA Cai-Feng1 YAO Huo-Chun1 LU Cheng-Ping1 ZHANG Wei1* (1. College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University , Nanjing , Jiangsu 210095, China) (2. School of Biological Engineering, Wuhu Institute of Technology, Wuhu, Anhui 241003, China) Abstract: [Objective] Riemerella anatipestifer (RA) is an important poultry pathogen. Considering the twenty-one serotypes, it still lacked a method for detecting multi-serotype