Sourthern blot与Northern blot原理.docVIP

Sourthern blot和Northern blot原理 （一）Southern Blot 原理： 将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定 后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自 显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。??用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。??DNA = 琼脂糖电泳 = 印迹转移 = 预杂交 = 杂交（变性探针） = 洗膜 = 放射自显影或显色 （二）Northern Blot 原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 mRNA提取 = 甲醛变性电泳 = 印迹转移 = 预杂交 = 杂交（变性探针） = 洗膜 = 放射自显影或化学发光 （三）二者异同 Southern blot 是分析DNA的杂交技术，Northern blot是分析RNA的，而Western blot是分析蛋白质的 Southern 和Northerin原理基本相同，都是利用DNA或RNA的复性过程，但过程上也有区别，主要是 Southern是先电泳后变性，而Northern是先变性后电泳； Southern是碱变性，而Northern采用甲醛、乙二醛、二甲基亚砜等变性，因为采用碱变性会导致RNA水解 （四）探针标记技术1 标记物：放射性和非放射性两种放射性：? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ???非放射性：生物素、地高辛素、荧光素 2、标记方法 （1）切口平移法 （2）随机引物法（3）末端标记法（4）单链DNA探针标记（5）寡核苷酸探针标记法