新型免疫检验技术-微粒子免疫标记检测技术的进.doc

PAGE PAGE 1 新型免疫检验技术-微粒子免疫标记检测技术的进 检验诊断在现代医学中重要地位： 对于任何疾病而言，早期检出与正确诊断是治疗的先决条件。随着医学科学的进展，疾病的诊断早已超越了”望、闻、问、切和视、触、叩、听的时代，对疾病的认识已深入到了细胞和分子水平，检验诊断的作用变得越来越重要。 病因的多样性、个体差异的悬殊性和疾病发生过程的及其复杂性决定了现代检验诊断的科学依赖性。检验诊断在某些疾病或某些情况下可能是唯一可靠的诊疗方法，如绝大多数的内分泌疾病、免疫性疾病、变态反应性疾病、代谢性疾病和早期肿瘤等。试想没有血糖与胰岛素的检测，医生将难以对糖尿病患者的病情、状态作出准确的诊断，尤其是那些尚无临床症状的糖尿病患者；再如绝大多数感染性疾病，对病因的确认必须依靠实验诊断手段；众所周之，肿瘤的早期检出对其治疗和预后是至关重要的，由于肿瘤本质是细胞层面的疾病，其早期检出只能依赖于现代影像检查和临床实验检查。总之，检验诊断已成为当前疾病诊疗过程中的极为重要的一个环节。 免疫学检验技术的应用现状： 免疫学检测由于它的高特异性、高敏感性成为检测领域里的主要技术平台，其基本原理是抗原与抗体间的建立在细微分辨基础上的非共价结合反应。最初的免疫反应仅在抗原抗体间进行，随着相关学科的技术进步，抗原和抗体的任一方可作为载体交联某种物质，承载基本的免疫反应，因而大大扩展了其应用范围。除了用于医学领域外，在化学、生物化学、毒理学、环境学等等都有广泛应用。而且，通过酶、核素、发光物质等放大效应用于该系统，免疫检测的敏感度也从最初的mg/L水平提高到了ng/L水平。累积的量变终将会带来质变，正是这些技术的进步使得对疾病的认识有了质的飞跃，使医学检验真正变成了检验医学，成为医学科学的重要分枝。 综观目前的免疫学检验技术，基本上可分为两大类别、三种形式，一是分子水平上的物质检测，二是细胞或颗粒水平上的分子检测，通常都在液态环境中进行。分子水平上的物质检测是免疫学检测的主要应用方式。分子水平的免疫检测主要有二种形式，一是液态中成分的表面固相包被检测(如目前普遍使用的酶标板、塑料管等)，二是液态中成分的微粒包被检测。酶标记免疫吸附检测(EnzymeLinkedImmunoSorbentAssay，ELISA)技术建立是1972年，因其敏感度高，操作简便、检测设备简单以及技术难度较小得到广泛应用，已成熟的应用于各个领域，迄今仍占到国内免疫检测市场用量的70%左右。 微粒子标记免疫检测技术的优势： 微粒子(微球)标记免疫检测(Microparticlelabeledimmunoassay)技术是近十几年来在ELISA基础上发展起来的免疫检测技术平台，目前主要有两大技术体系。 一是MASATM液相微球(Multi-AnalyteSuspensionArray)技术，是美国纳斯达克上市公司Luminex研制出的新一代生物检测技术，是提供高通量的新一代分子诊断技术平台。微球由聚苯乙烯制成，直径10nm~100um。在制造中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种红色分类荧光的比例不同，可以把球形分为100种，这样每个微球都有了一个光谱范围。每个微球都是一个独立的、特异性的反应单位。对不同指标的颗粒可以放在一个反应体系内，从而形成以计数形式达到计量的目的。其主要技术特点是：以计数方式间接计量，FCM技术形式，多项检测同时进行，快速，每秒数千到上万微球的计数速度，无需分离体系。该技术在欧美已应用多年，由于注册等原因，国内进展较慢。 而二是微粒子免疫标记发光技术，该技术以微粒替代平板，大大增加了免疫承载反应表面和速度(粒子与液态中的分子的双向运动代替了ELISA中液态分子的单项扩散)。同时，由于微粒子的分离、洗涤均较平板方便，所以有利于提高自动化程度。在微粒子基础上应用发光放大系统，使检测敏感度得到进一步提高，理论上微粒子发光检测的敏感度比ELISA提高数百至上千倍。综上技术优势，微粒子发光免疫检测较之ELISA在敏感性、准确性、重复性和自动化程度上均有提高，是国外几大试剂公司目前在用和推广的重点技术平台。以上海市场为例，仅罗氏、雅培两大公司的免疫诊断试剂约占上海市场供应量的50%，但市场销售额却占了70-80%，两公司在上海的年销售额近二亿元人民币。罗氏的Elecsys2010和E170，雅培的Axsym和i2000是目前在用的主流仪器，均采用微粒技术，只是信号放大系统有所不同。 在技术层面上，微粒子发光技术较之ELISA要复杂的多，首先是材料与工艺学，微粒的用材和工艺要求很高，制备上要求严格的均一性，因而国内迄今无此类商品可购；微粒子本身是惰性材料，须经多重处理才能与有机分子交联，其中涉及复杂的化学修饰和处理过程；微粒的洗涤、分离与承载免疫反应