第二章天然药物化学成分的提取方法.pptVIP

洗脱剂、展开剂 化合物被吸附剂吸附后，需用合适的溶剂进行展开，这种溶剂称为展开剂，在柱色谱中习惯称为洗脱剂。展开剂在吸附色谱中主要作用是解吸附。 在吸附色谱中，洗脱剂的洗脱能力与其极性有关。对于极性吸附剂（硅胶、氧化铝），洗脱剂的极性越大，其洗脱能力越强，化合物在色谱中移动的速度就越快，而对非极性吸附剂（活性炭）则相反，洗脱剂的极性越小，其洗脱能力越强。 被分离成分与吸附剂、洗脱剂共同构成了吸附色谱中的三要素。 对硅胶、氧化铝等极性吸附剂来说，对极性大的化合物吸附强，移动慢，Rf值小；而对极性小的化合物吸附弱，Rf值大，从而将各成分分离开。 全面考虑吸附剂、展开剂和被分离成分三者的相互关系，是分离成败的关键。 被分离物质 吸附色谱法的操作方式 1） 薄层色谱： 制板 点样 展开 显色 2） 柱色谱： 装柱 上样 洗脱 收集 浓缩 检识 合并 结晶 （1）吸附薄层色谱法（TLC） 此法是将吸附剂均匀地铺在玻璃板上形成薄层，把欲分离的试样溶液点加到薄层板的一端，然后用合适的展开剂展开，使混合物中各成分得以分离的方法。 吸附薄层色谱的操作主要包括铺板（制板）、点样、展开和显色四个方面。实际工作中常用硅胶-羧甲基纤维素钠（硅胶CMC-Na）薄层板，展开方式有上行法、下行法、单向展开、双向展开等多种。 Rf 作为定性指标 将计算出的Rf值与已知化合物的Rf值对照，也可与文献上记载的Rf值比较，进行定性鉴别。 TLC的应用 薄层色谱： 1、主要用于各类化学成分的预试验、分离鉴定及探索柱色谱分离的条件 2、应用于中草药品种、药材及其制剂真伪的检查、质量控制和资源调查。《药典》一部采用薄层色谱法作鉴别的中药材和中药成方制剂品种已达1523种。 （2）吸附柱色谱法 吸附柱色谱法是将试样加入到一定规格装有吸附剂的玻璃柱里，再用适当的溶剂洗脱，使结构性质不同的成分达到分离的方法。其分离原理、吸附剂和洗脱剂的选择均与吸附薄层色谱法基本相同。柱色谱的具体操作可分为装柱、加样和洗脱三步。 柱色谱主要用于化学成分的分离制备及含量测定 2、分配色谱法 原理： 分配色谱的原理来自于两相溶剂萃取法。利用被分离成分在固定相和流动相之间的分配系数的不同而达到分离的方法。 分类： 按照固定相与流动相的极性差别，分配色谱法有正相与反相色谱法之分。 正相色谱：固定相极性流动相极性， 用于分离极性和中等极性的成分。 反相色谱：固定相极性流动相极性（反相分配色谱法应用广泛） 用于分离非极性和中等极性的成分 反相分配色谱法 固定相： 常用的固定相有十八烷基硅烷（ODS）或C8键合相。在普通硅胶表面进行化学修饰，键合上长度不同的烃基（R）形成亲脂性表面，习称键合相，如十八烷基或辛基硅烷键合相。中药中的各种苷类特别适合用反相色谱法分离。 流动相： 常用甲醇-水 或乙腈-水系统 反相分配色谱法 洗脱规律： 反相色谱中，极性大的化合物先被洗脱，极性小的化合物后被洗脱 3、离子交换色谱法 （ion exchange chromatography） 1）原理 树脂与被交换成分间同种电荷离子的等当量替代作用。以离子交换树脂为固定相，水或酸水、碱水为流动相，在流动相中的离子性物质与树脂进行交换而被吸附，再用适合溶剂将被交换成分从树脂上洗脱下来即可。 阳离子交换树脂：强酸型 R-SO3-H+ 和弱酸型-COO-H + 。 阴离子交换树脂：强碱型 RN + (CH3)3CI-（三甲胺基 ）和弱碱型 -NR2、 - NHR、-NH2（伯、仲、叔胺）等。 2）离子交换平衡式 阳离子交换树脂： 阴离子交换树脂： 式中R－SO3— H + 、R－N +(CH3)3·OH-分别代表阳离子和阴离子交换树脂，在水中可分别电离出H +和OH -，其中H +与Na +交换，OH -与Cl -交换，使反应不断地向右方向进行，直至交换完全，而且这种交换反应是可逆的。当再分别用HCl和NaOH洗脱柱子时，反应按逆方向进行，将Na +和Cl -分别洗脱交换下来。 3）离子交换色谱的应用 离子交换色谱法主要用于能产生离子的成分分离。某些中药成分具有酸性、碱性及两性基团，如有机酸、酚类、氨基酸、肽类、生物碱等，在水中多呈离解状态，可用离子交换树脂法进行分离。 中药中的碱性成分可用阳离子交换树脂交换，酚\酸性成分可用阴离子交换树脂交换，然后将交换后的树脂通