生化二新试验萌发进程中种子基本生物分子含量变化及呼吸.pptVIP

萌发进程种子基本生物大分子含量变化及呼吸-光合作用调节;目的要求;生物大分子指的是作为生物体内主要活性成分的各种分子量达到上万或更多的有机分子。常见的生物大分子包括蛋白质、核酸、脂类、糖类。 生物大分子的特点在于其表现出的各种生物活性和在生物新陈代谢中的作用。 生物大分子大多数是由简单的组成结构聚合而成的，eg. 蛋白质的组成单位是氨基酸，核酸的组成单位是核苷酸。 生物大分子都可以在生物体内由简单的结构合成，也都可以在生物体内经过分解作用被分解为简单结构，一般在合成的过程中消耗能量，分解的过程中释放能量。;理论基础;核苷酸 ;植物的光合作用;光合作用的过程：;植物的呼吸作用;有氧呼吸的三个阶段;有氧呼吸： （1）主要场所——线粒体 　　 （2）总反应式：;无氧呼吸;无氧呼吸;光合作用与呼吸作用的区别：;瓦氏呼吸仪工作原理及本探索侧重点;呼吸仪装置图;实验仪器与试剂;方法步骤;方法步骤;瓦氏呼吸仪数据处理;思考题;种子萌发前后DNA、RNA 的提取及含量测定;目的要求 ;核酸是遗传信息的携带者，是生命的最基本物质，它和蛋白质是构成生物体的主要成分； 按化学组成可以将核酸分成两大类： ① 含脱氧核糖核酸（DNA）； ② 含核糖核酸（RNA）； 在生物体中核酸以结合成核蛋白的形式存在，但核酸极不稳定，在较剧烈的物理、化学因素和酶的作用下都很易降解。 核酸的分布：细胞核、线粒体、叶绿体、核糖体、游离 ;核酸分离、纯化原则;注意：;1、RNA的提取与测定;工业提取RNA的方法;浓盐法：使用10％氯化钠的溶液，同时在90摄氏度热处理3-4小时，以改变细胞壁的通透性，使核酸从细胞内释放出来。经冷却，离心后上清液用乙醇沉淀RNA。 稀碱法：使用0.2％氢氧化钠裂解酵母，然后用酸中和，除去蛋白和菌体，上清液用乙醇沉淀RNA，或调体系pH值至RNA的等电点PI 2.5 ，沉淀目的样品。;原理：1）动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开；2）植物组织含有大量的多酚类植物色素，它们与核酸结合能力较强且易于氧化，在核酸分离进程中需要抑制植物色素的氧化对它们进行分离。 方法：先用研钵将植物细胞破碎成粉末，再用0.14mol/L 氯化钠溶液把细胞中的 RNP 提取出来，最后用酚将RNA和蛋白质分开。;RNA 提取;RNA含量测定方法;核酸浓度： ssRNA浓度（μg/mL）=40×（OD260-OD280）×稀释倍数 ssDNA浓度（μg/mL）=33×（OD260-OD280）×稀释倍数 dsDNA浓度（μg/mL）=50×（OD260-OD280）×稀释倍数 其中 纯的DNA样品其OD260/OD280大于或等于1.8 当值大于1.9说明有RNA污染，小于1.6说明有蛋白质或者酚类污染； 纯的RNA样品其OD260/OD280大约为2 当比值在1.7-2.0之间可以说明RNA较纯，当比值小于1.7说明RNA受到蛋白质或者酚类污染，比值大于2.0说明RNA受到异硫氰酸污染。 OD260/OD230用于估计样品的除盐程度 OD260/OD230小于2.0说明除盐不充分，需要进一步做70%乙醇洗涤。; 在酸性环境中，定磷试剂中的钼酸铵以钼酸形式与样品中的磷酸反应生成磷钼酸，当有还原剂存在时磷钼酸立即转变蓝色的还原产物―钼蓝。 H3PO4+12H2MoO4→H3P(Mo3O10)4+12H2O ↓还原剂 钼 蓝 钼蓝最大的??吸收在650-660nm波长处。当使用抗坏血酸为还原剂时，测定的最适范围为1-10微克磷。;思考题 RNA 提取方法有几种？有什么优缺点？ RNA 提取过程中应注意什么？ 植物核酸提取需要注意的事项是什么？ ;DNA的提取及含量测定;去除蛋白的常用方法;DNA的提取;DNA含量测定方法;思考题;工 艺 图;种子萌发前后蛋白质 的提取及含量测定;蛋白质含量测定方法;双缩脲法测蛋白含量实验原理;Bradford法;BCA（Bicinchoninic acid）法;Lowry法（Folin-酚法）;凯氏定氮法;紫外吸收法;样品制备;标准曲线制备;思考题;种子萌发前后糖 的提取及含量测定;糖含量检测方法;硫酸蒽酮法;硫酸苯酚法;DNS法;样品制备;硫酸蒽酮法测定糖含量;思考题;种子萌发前后