实验五-放线菌与真菌形态结构观察.doc

实验报告 课程名称：环境微生物学实验 实验类型： 综合实验 实验项目名称： 放线菌与真菌形态结构观察 学生姓名： 专业： 环境工程 学号： 同组学生姓名： 指导老师： 实验地点： 实验日期： 2018 年 10月 16日 一、实验目的和要求 学习并掌握放线菌(链霉菌)，真菌(酵母、霉菌)形态结构的观察方法，认识并理解它们的形态特征。 熟练掌握显微镜的使用。 二、实验内容和原理 放线菌 放线菌，是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基内菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。 真菌 酵母菌：为单细胞真核生物。呈圆形、卵形、椭圆形或柠檬型。各体直径比细菌大几倍到几十倍。菌落大而厚，湿润光华，颜色多为乳白色、灰白色、似细菌落。繁殖方式包含无性繁殖(芽殖或裂殖)与有性繁殖(形成子囊与子囊孢子)。 酵母菌的出芽生殖：在细胞的一端初生小突起，如芽状，逐渐增大。细胞核一分为二，其中一个进入小突起，经细胞壁缢缩。芽体与母细胞脱离，形成新个体。若芽体不脱离母体而有继续生出新芽，而芽细胞聚集形成芽簇，芽簇细胞伸长呈丝状或藕节状，称做假菌丝。 美兰染色法：美兰是一种无毒性染料，氧化型呈蓝色，还原型呈无色。活细胞具有较强还原能力，使美兰由蓝色变成无色。染色后，酵母活细胞无色，死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞呈蓝色或淡蓝色。 酵母菌肝糖粒碘液染色：肝糖粒是酵母细胞的内含物，属于碳源及能源性贮藏物。用碘液染色，菌体呈淡黄色，肝糖粒呈红褐色。 霉菌：由菌丝体构成，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝长到一定阶段分化产生繁殖菌丝。由繁殖菌丝产生孢子。菌丝和孢子的宽度比细菌和放线菌大几倍到几十倍。制片时滴加乳酚油，防止干燥，可保持菌丝体原形。 黄曲霉：唯一种常见的腐生真菌，多见于发霉的粮食、蔬菜及水果。形态上有明显的分生孢子结构，分生孢子梗从足细胞上生长出来，往上延伸膨大呈顶囊，顶部有一至二层结构，分别为出生小梗及次生小梗。回曲霉在成熟时还可以产生黄曲霉毒素，为黄曲霉的剧毒代谢产物，为强致癌物。 青霉：唯一种常见的腐生植物，多见于发霉的粮食、蔬果。形态上具有帚状的分生孢子(包含包生孢子梗、梗基、小梗、分生孢子)。青霉常被应用于有机酸及抗生素的生产。 黑根霉：亦称面包需或匐枝根霉，常出现于发霉的面包、米饭等食物上，瓜果腐烂。出现黑斑与具有关。具有匍匐菌丝、假根、包囊梗、孢了囊、包囊孢子。黑根霉常用于果胶酶、淀粉酶的生产。黑根霉的接合孢子是黑根霉的一种有性孢子，使由两条不同性别的菌丝特化后形成配子囊，配子囊接合后形成接合孢子。 三、主要仪器试剂（必填） 菌种：链霉菌5天板培养物、黄曲霉4~5天平板培养物、青霉4~5天平板培养物、黑根霉7天平板培养物、啤酒酵母2天培养物 示范片:黑根霉及其接合孢子 仪器及相关用品:乳酚油、碘液、0.1%美兰、50%酒精、蒸馏水、载玻片、盖玻片、接种环、镊子、解剖刀、酒精灯、显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、镜头洗液。 四、操作方法和实验步骤 放线菌形态结构的观察： 个体形态直接观察法: 观察青色链霉菌菌丝和孢子丝自然生长的性状，包括气生菌丝(粗、亮)，基内菌丝(细、暗)和孢子丝的形状，如分枝状况及孢子丝卷曲等。 印片染色法: 微热载玻片印片→过火固定→石炭酸复红染色→lmin水洗→干燥→镜检(高倍镜和油镜) →绘图说明。 酵母菌形态观察: 美兰染色法： (1)先在载玻片上加一小滴美兰染色液，用接种环挑取一环酵母菌液，与载玻片， 上的美兰染色液充分混匀，盖上盖玻片。 (2)将制片放置约3 min，先低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。 肝糖染色法； (1)先在载玻片，上加一小滴碘液，用接种环挑取一环酵母菌液，与载玻片上的碘液充分混匀，盖上盖玻片后镜检。 (2)在高倍镜下观察菌体形态、出芽、芽簇、肝糖粒，通常菌体呈淡黄色，肝糖粒呈红褐色，并绘图。 黄曲霉的形态观察:观察黄曲霉菌丝分隔情况和分生孢子着生情况，着重辨认分生孢子梗、顶囊、小梗、分生孢子、足细胞等。 (1)无菌操作用解剖针挑取或镊子夹取少许黄曲霉培养物(菌丝并略带少量培养基)，置于洁净的载玻片上，加酒精和蒸馏水各一滴，重复一次，使分生孢子分散，便于观察。 (2)倾去酒精和蒸馏水，加一滴乳酚油，防止细胞变形或干燥，盖上盖玻片(适当用手指压实、除气泡) 低、中、高倍镜观察，绘图。 青霉的形态观察:制作青霉标本片，着重辨认帚状体(分生孢了梗、小梗、分生跑了)，并绘图。 黑根霉的形