低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响-江苏大学.PDFVIP

第２４卷第３期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２４ Ｎｏ．３ 　 ２０１４年５月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｙ２０１４ 　 　 　 　 　 　 低温冻存对人脂肪间充质干细胞生物学特性的影响 李兴天，李小战，马红，许辉，李淑，李遇梅 （江苏大学附属医院皮肤科，江苏 镇江２１２００１） ［摘要］　目的：比较人脂肪间充质干细胞（ｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ｈＡＤＳＣｓ）冻存前和复苏后的 生物学特性，为今后建立低温干细胞库提供实验支持。方法：采用０．１％ 型胶原酶消化法从腹部大网膜脂肪组织 Ⅰ 中分离ｈＡＤＳＣｓ，体外培养扩增，将处于均一稳定生长状态的第３代ｈＡＤＳＣｓ置于液氮中分别冻存 １、３和６个月，复苏 后台盼蓝染色检测细胞存活率，采用ＭＴＴ法绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞表面抗原，成脂成骨诱导后鉴定 多向分化能力，ＲＴＰＣＲ检测成脂特异性基因过氧化物酶体增殖物激活受体 ２（ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒａｃｔｉｖａｔｅｄ γ ｒｅｃｅｐｔｏｒ２，ＰＰＡＲ２）和成骨特异性基因骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ，ＯＣ）的表达情况。结果：随冻存时间的延长细胞存活率 γ γ 略有下降，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。ＭＴＴ结果显示冻存前后细胞增殖能力均很强。流式细胞检测结果显示冻 存前后细胞均高表达ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＣＤ１０５和ＣＤ１６６，低表达ＣＤ４５和ＨＬＡＤＲ。冻存前后ｈＡＤＳＣｓ均具有向 脂肪细胞和骨细胞分化潜能，且ＲＴＰＣＲ结果显示，ＰＰＡＲ２和骨钙素ｍＲＮＡ的表达冻存前后差异均无统计学意义（Ｐ γ ＞０．０５）。结论：经液氮冻存后的ｈＡＤＳＣｓ具有高存活率，生物学特性保持稳定且仍具有多向分化潜能。 ［关键词］　人脂肪间充质干细胞；冻存；生物学特性；干细胞库 ［中图分类号］　Ｒ３２９．２　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１４）０３－０１９０－０５ ＤＯＩ： １０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１４００７０ Ｅｆｆｅｃｔｏｆｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｈｕｍａｎ ａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ ＬＩＸｉｎｇｔｉａｎ，ＬＩＸｉａｏｚｈａｎ，ＭＡＨｏｎｇ，ＸＵＨｕｉ，ＬＩＳｈｕ，ＬＩＹｕｍｅｉ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＤｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＺｈｅｎｊｉａｎｇＪｉａｎｇｓｕ２１２００１，Ｃｈｉｎａ） ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｐｒｏｖｉｄｅｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｓｕｐｐｏｒｔｆｏｒｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇａｌｏｗｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓｔｅｍｃｅｌｌ ｂａｎｋｆｏｒｆｕｔｕｒｅｕｓｅ，ｆｒｅｅｚｅｔｈａｗｅｄｈｕｍａｎａｄｉｐｏｓｅｄｅｒｉｖｅｄｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ（ｈＡＤＳＣｓ）ｗｅｒｅｃｏｍ ｐａｒｅｄｗｉｔｈｆｒｅｓｈｈＡＤＳＣｓｉｎｖｉｔｒｏ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｈＡＤＳＣｓ