利用环介导等温扩增方法快速检测瓜类细菌性果斑病菌-植物保护学报.PDFVIP

植物保护学报Journal of Plant Protection ，2018 ，45 （6）：1235-1241 DOI ：10.13802/j.cnki.zwbhxb.2018.2017106 利用环介导等温扩增方法快速检测瓜类细菌性 果斑病菌和番茄细菌性溃疡病菌 1 1 2 1* 1 1* 吴秀芹 杨樱子 罗金燕 邱 文 安千里 李 斌 （1. 浙江大学生物技术研究所，农业部作物病虫分子生物学重点实验室，杭州310058 ； 2. 上海市农业技术推广服务中心，上海201103 ） 摘要：为建立简单、快速和灵敏地检测瓜类细菌性果斑病菌Acidovorax avenae subsp. citrulli （Aac ） 和番茄细菌性溃疡病菌Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis （Cmm ）的环介导等温扩增 （loop-mediated isothermal amplification ，LAMP ）方法，以Aac 的ugpB 基因和Cmm 的micA 基因为靶 标，分别设计、合成和筛选特异性引物，摸索和优化各项反应条件和反应体系，成功建立了以钙黄绿 素颜色为指示且只需要金属浴恒温反应30~60 min 的LAMP 扩增体系。特异性分析表明该LAMP 方法可以快速检出5 株不同的Aac 菌株和2 株不同的Cmm 菌株，其它对照菌株如燕麦嗜酸菌燕麦 亚种A. avenae subsp. avenae、丁香假单胞菌Pseudomonas syringae 、水稻黄单胞菌水稻致病变种 Xanthomonas oryzae pv. oryzae 和茄科雷尔氏菌Ralstonia solanacearum 则呈现阴性反应；引物比目 2 前报道的LAMP 引物有更高的DNA 样品检测灵敏度，Aac 和Cmm 的灵敏度分别为1.72×10 fg/μL 2 和1.26 ×10 fg/μL 。研究结果表明，所设计的Aac 和Cmm 引物特异性好、灵敏度高，更有利于从源 头上控制这2 种检疫性细菌病害的流行和传播。 关键词：瓜类细菌性果斑病菌；番茄细菌性溃疡病菌；环介导等温扩增方法；快速检测 Rapid detection of Acidovorax avenae subsp. citrulli and Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis with loop-mediated isothermal amplification Wu Xiuqin1 Yang Yingzi1 Luo Jinyan2 Qiu Wen1* An Qianli1 Li Bin1* （1. Key Laboratory of Molecular Biology of Crop Pathogens and Insects, Ministry of Agriculture; Institute of Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou 310058, Zhejiang Province, China; 2. Shanghai Agricultural Technology Extension Service Center, Shanghai 201103, China） Abstract: To establish a simple, sensitive and rapid loop-medi