第八版课件-RNA的生物合成.pptx

生物化学与分子生物学;第十六章;在生物界，RNA合成有两种方式;转录 (transcription) 是生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 ;;复制和转录的区别;原核生物转录的模板和酶 Templates Enzymes in prokaryotic transcription;参与转录的物质：;一、原核生物转录的模板;5′···GCAGTACATGTC ···3′;;二、 RNA聚合酶催化RNA合成;DNA依赖的RNA聚合酶催化RNA合成的机制 ;;（二）RNA聚合酶由多个亚基组成;核心酶 (core enzyme);RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合;大肠杆菌内有一些不同的RNA pol全酶，其差异是σ亚基的不同。目前已发现多种σ亚基，并用其分子量命名区别，最常见的是σ70（分子量70 kDa）。σ70是辨认典型转录起始点的蛋白质，大肠杆菌中的绝大多数启动子可被含有σ70因子的全酶所识别并激活。 但有些基因的启动子，如热激蛋白（heat shock proteins, Hsp）也为另外的σ亚基（σ32 ）识别。;三、RNA聚合酶结合到DNA的启动子上启动转录;;RNA聚合酶保护法;;原核生物的转录过程 The Process of Transcription in Prokaryote;原核生物的转录过程可分为转录起始、转录延长和转录终止三个阶段。 ;RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。;2. DNA双链打开，形成开放转录复合体(open transcription complex) ；DNA分子接近-10区域的部分双螺旋解开后转录开始。 DNA双链解开的范围只在17 bp左右，这比复制中形成的复制叉小得多。 ;E.coli的转录起始和延长 ;;二、 RNA pol核心酶独立延长RNA链;大肠杆菌的转录泡局部结构示意;转录延长以下特点 ;转录过程中DNA的超螺旋结构变化;三、原核生物转录延长与蛋白质的翻译同时进行;;依赖?因子的转录终止 非依赖?因子的转录终止;?因子是由相同亚基组成的六聚体蛋白质，亚基分子量46kD。 ?因子能结合RNA，又以对poly C的结合力最强，但对poly dC/dG组成的DNA的结合能力就低得多。 ?因子还有ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性。;?因子的作用原理：;（二） 非依赖 ?因子的转录终止;茎环结构使转录终止的机制;真核生物RNA的生物合成 The Biosynthesis of Eukaryote RNA;;一、 真核生物有三种DNA依赖的RNA聚合酶;真核生物的RNA聚合酶;;RNA聚合酶Ⅱ由12个亚基组成，其最大的亚基称为RBP1。 RNA聚合酶Ⅱ最大亚基的羧基末端有一段共有序列(consensus sequence)为Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser的重复序列片段，称为羧基末端结构域(carboxyl-terminal domain, CTD)。 CTD对于维持细胞的活性是必需的。 RNA polⅡ是真核生物中最活跃、最重要的酶，故本章叙述的真核生物的转录主要以RNA polⅡ所催化的转录反应为例。 ;二、转录因子在真核生物转录起始中具有重要作用 ;（一）转录前起始复合体的形成;;;能直接、间接辨认和结合转录上游区段DNA的蛋白质，现已发现数百种，统称为反式作用因子(trans-acting factors)。 反式作用因子中，直接或间接结合RNA聚合酶的，则称为通用转录因子（general transcription factor）或基本转录因子（basal transcription factor） ;;参与RNA-polⅡ转录的TFⅡ的作用;真核RNA聚合酶Ⅱ与通用转录因子的作用过程 ;闭合转录复合体的形成步骤 ;TFIIH具有解旋酶（helicase）活性，能使转录起点附近的DNA双螺旋解开，使闭合转录复合体成为开放转录复合体，启动转录。 TFIIH还具有激酶活性，它的一个亚基能使RNA pol II的CTD磷酸化。 CTD磷酸化能使开放复合体的构象发生改变，启动转录。CTD磷酸化在转录延长期也很重要，而且影响转录后加工过程中转录复合体和参与加工的酶之间的相互作用。 当合成一段含有60～70个核苷酸的RNA时，TFIIE和TFIIH释放，RNA pol II进入转录延长期。此后，大多数的TF就会脱离转录前起始复合物。 ;除了基本转录因子外，真核基因的转录起始还有其他转录因子的参与，如与启动子上游元件如GC盒、CAAT盒等顺式作用元件结合的上游因子（upstream factor），与远隔调控序列如增强子等结合的反式作用因子，以及在某些特殊生理或病理情况下被诱导