多联实时荧光PCR定量方法检测四种肠道细菌的研究.PDFVIP

2005 5 5 　CHINA T ROPICAL MEDICIN E Vo .5 No.5 August 2005 943 [　　] PCR 1 1 1 1 1 2 2 2 彭雁忠, 贾宏, 邹虹, 李瑜, 黄君美, 肖性龙, 黄胜中, 林镜中 摘要:目的　建立 一种能同时检 空肠弯曲菌(CJ )、肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7、副溶血性弧菌(VP)和单 核增生李斯特菌(LM)的多联实时荧光PCR 定量方法。 　方法　根据CJ 的C 基因序列、EHEC O157:H7 的 RFBE 基因 序列、VP 的 toxR 基因序列和LM 的 iap 基因序列的开放阅读框(ORF ), 分别利用ABI primer experess 2.0 和DNAStar 中 的Primer Se ect 软件设计出了数对特异性的引物和探针, 筛选出最佳的各组引物和探针组合, 对引物、探针的浓度、 Mg2+浓度、Taq 酶的用量、反应条件等进行优化, 从而建立了检 临床标本中CJ 、O157:H7、VP 和 LM 的多联荧光PCR 反应体系和检 方法。 　结果　实验显示该方法具有特异性强, 灵敏度高, 均达到 100copies/m 。 　结论　多联实时 荧光PCR 方法可定量检 临床标本中CJ 、O157:H7 、VP 和LM, 该法快速简便, 准确高效, 有利于上述病原菌所致疾病 的早期诊断和治疗。 关键词:空肠弯曲菌;肠出血性大肠杆菌O157:H7;副溶血性弧菌;单核细胞增生李斯特菌;多联;荧光PCR 中图分类号:R378.2 　　文献标识码:A 　　文章编号:1009-9727(2005)05-943-05 Study on the detection of four intestinal bacteri a by using quantitative multi-link real-time PCR.PENG Yan-zhong, JIA Hong, ZOU Hong, et a .(Shenzhen Hospita of Beijing Univeristy, Shenzhen 518000, Guangdong, P.R.China) Abstract:Objective 　To set up the quantitative method of mu ti - ink rea time uorescence PCR for detection of Campylobacterj ej uni (CJ), Enterohemorrhagic escherichia coli O157:H7 (EHEC O157:H7), Vibrio parahaemolyticus (VP), Listeria monocytogenes (LM )at the same time.　Methods　According to the open reading frame (ORF)of sequence of CJ- C, O157:H7-RFBE gene, VP- toxR gene, and, LM- iap gene, severa coup es of specific primer and probe w ere designed, with u- ti ization of Primer Se ect softw are among the ABI primer experess 2.0 and DNAStar respective y.Optima combination of every primer 2+ and probe w as choiced out.Optimization