中温木聚糖酶高产真菌菌株筛选及产酶条件.docVIP

中温木聚糖酶高产真菌菌株筛选及产酶条件 摘要:利用以木聚糖作为惟一碳源的基础盐培养基,在30℃培养条件下,从新乡周边土样及腐殖质中筛选到1株β-木聚糖酶高产真菌菌株(Fusarium sp. FLH28)?该菌株在20~40 ℃生长良好,最适生长温度30 ℃?产酶培养条件优化结果表明,在培养温度为30 ℃,培养基初始pH 6.0,以玉米芯为碳源,以蛋白胨?酵母粉和玉米浆为有机氮源,发酵4 关键词:中温木聚糖酶;真菌;筛选菌株;产酶条件 Screening and Identification of Moderate Temperature β-Xylanase-Producing Fungi and Optimizing Conditions for Enzyme Production Abstract: A β-xylanase producing fungi, Fusarium sp. FLH28, was isolated from soil and humus samples from Xinxiang at 30 ℃ by using basal medium supplemented with xylan as the sole carbon source. The strain FLH28 was capable of growing well at 20~40 ℃; and the optimum growth temperature was 30 ℃. The optimized enzyme production conditions of the strain were as follows, initial pH, 6.0; corncob as carbon source; peptone, yeast extraction and corn steep liquor as nitrogen sources; incubating for 4 d at 30 ℃ Key words: moderate temperature xylanase; fungi strain(Fusarium sp. FLH28); screening; conditions of enzyme production 木聚糖是植物细胞主要结构性多糖,主链由多个β-D-吡喃木糖基通过β-1,4-糖苷键连接的复杂分子多聚糖,主链连有各种取代基,分子中含有许多葡萄糖醛酸?乙酰基?阿拉伯糖?阿魏酸?香豆酸等侧链基团[1]?木聚糖是自然界含量仅次于纤维素的第二大类多糖,是半纤维素中含量最丰富的一种组分,占地球可再生有机碳的1/3[2]?它的存在使谷物中的营养物质不能被充分暴露于动物消化液的表面,进而影响动物的消化吸收,降低了饲料的营养价值?木聚糖酶(Xylanase,EC 3.2.1.8)主要以内切方式作用于木聚糖主链上的β-1,4-糖苷键,水解生成以木二糖为主的低聚糖[3],它在生物转化?食品?饲料?医药?能源?造纸?纺织等行业中有着广泛的应用[4],具有很大的商业开发价值?迄今为止,关于产无纤维素酶活性木聚糖酶的菌株报道很多,包括细菌?真菌和放线菌,其中曲霉属和芽孢杆菌属种类最多[5-8]? 目前,关于耐高温木聚糖酶菌株的筛选是木聚糖酶研究的一个热点,耐高温木聚糖酶对于工业生产木糖高温快速反应及饲料用酶制粒过程的酶活损失有一定的优点,但在37 ℃左右普遍存在酶活较低的问题,对于一些瘤胃动物来说,其最适作用pH往往偏离中性的范围,不利于在饲料中的应用?因此,筛选中温?最适pH中性且在一定范围内有良好热稳定性的产木聚糖酶菌株对于木聚糖酶在饲料中的应用具有重要的作用?目前人们研究较多的真菌主要包括木霉?毛霉和曲霉等,关于镰刀菌属(Fusarium)菌种产木聚糖酶的研究很少,且产酶水平较低,在30 U/mL以下[9-12]?试验筛选得到1株高产木聚糖酶菌株 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 样品采集 样品采集于河南新乡周边土壤及太行山南麓丛林土壤及腐殖质中? 1.1.2 培养基 1)筛选培养基(g/L):NH4Cl 1.0,(NH4)2SO4 1.0,KH2PO4 0.1,CaCl2 0.4,MgSO4·7H2O 0.1,玉米芯木聚糖1.0,琼脂粉15.0,用HCl调pH 至5.5? 2)分离培养基:PDA培养基[13]? 3)发酵基础盐培养基(g/L):KH2PO4 1.0,MgSO4·7H2O 0.3,CaCl2 0.4,FeSO4·7H2O 0.1? 1.1.3 试剂 酵母提取物?胰蛋白胨(Oxoid);榉木木聚糖?地衣多糖?昆布多糖?微晶纤维素(Avic