常见微生物培养-检测技术.pptVIP

细菌培养方式 用人工方法,将细菌从自然界、动物体或病料中分离出来,研究细菌的形态、生理特性、生物学特性或制取细菌的某种代谢产物等,这对于传染病的诊断和防治具有重要意义。 根据不同标本及不同培养目的,可选用不同的接种和培养方法。常用的有分离培养和纯培养两种方法。 (一)培养基的种类和常用培养基 培养基的概念： 将细菌所需的各种营养物质按一定比例混合在一起,并调节到适宜的PH,这种人工配制的适合细菌生长繁殖的细菌营养物,称为培养基。 1.培养基的种类 按培养基的组成成分分类 合成培养基、天然培养基 按培养基的物理状态分类 液体培养基、半固体培养基、固体培养基 按培养基的功能分类 基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基、厌氧培养基。 (1)基础培养基 含有培养一般细菌的最基本成分。又分为:液体培养基、固体培养基和半固体培养基三种。在液体(肉汤)培养基中,加入2%-3%琼脂即为固体培养基,加入0.2%-0.5%琼脂即为半固体培养基。 (2)营养培养基 于基础培养基中加入高营养物质如葡萄糖、血液、血清、腹水、生长因子等,以满足营养要求较高的细菌生长需要 有的细菌还需加入特殊物质,如结核杆菌需加入鸡蛋清、马铃薯、甘油等才能良好生长 (3)选择培养基 利用细菌对某种物质敏感程度的不同,可在培养基中加入抑制某些细菌生长的药物,而选择性地让欲分离的细菌旺盛生长的培养基,如胆盐和蔷薇色酸可以选择性地抑制G+菌的生长,而不影响G－菌的生长。 在培养基中加入二药后可选择性地分离出肠道杆菌。 (4)鉴别培养基 利用细菌分解底物及其代谢产物的不同,可在培养基中加入某种物质和指示剂,即制为鉴别培养基,以测定不同细菌的生化反应。 (5)厌气培养基 将培养基与空气及氧隔离,或降低培养基中的氧化还原电势,供厌氧菌生长。 (二)细菌在培养基上的生长特征 有关概念 菌落:在固体培养基上,由单个细胞繁殖形成的肉眼可见的细菌集落,称为菌落。 菌苔:在固体培养基上,大量菌落密集生长,融合成一片,称为菌苔。 纯培养:挑取一个菌落到另一培养基桑培养,称为纯培养。 不同的微生物种类,其菌落特征不同。同一种菌在不同培养条件下菌落特征也不尽相同,细菌的生长特征有助于细菌的鉴定。 细菌分离培养形式及培养结果 致病菌的检验程序 细菌药敏试验结果 病毒 病毒的基本特征 没有细胞结构 可以透过细菌滤器 只含一种核酸（DNA或RNA） 严格细胞内寄生 增殖方式为核酸复制 对干扰素敏感，对抗生素不敏感 病毒的增殖 （一）病毒的感染 病毒与细胞相互作用称为病毒的感染。 1.溶解性相互作用：病毒增殖,宿主细胞被破坏或溶解,也可不破坏细胞,形成稳定状态感染。 2.转化性相互作用：病毒基因组与宿主细胞基因组整合,引起宿主细胞发生转化。有些非但抑制宿主细胞的生物合成,反而促进细胞分裂增生,导致肿瘤或细胞癌变。 （二）病毒的增殖 病毒自身无完整的酶系统,不能进行独立的物质代谢,必须在活的宿主细胞内才能进行生活、复制和增殖 由宿主细胞供应原料、能量和生物合成场所,在病毒核酸遗传密码的控制下,于宿主细胞内复制出病毒的核酸和合成病毒的蛋白质,进一步装配成大量的子代病毒,并将他们释放到细胞外,这种增殖方式称为复制 病毒的复制周期 （Replicative Circle） 定义：自病毒吸附于细胞开始，到子代病毒从感染细胞释放到细胞外的病毒复制过程称为病毒的复制周期。 病毒的复制增殖过程,大致包括吸附、穿入、脱壳、生物合成、装配和释放六个步骤。 1、吸附 2、穿入 (侵入) 3、脱壳 4、生物合成 5、装配 6、释放 一、动物接种 动物选择标准:对病毒的易感性高;动物健康,体重、年龄尽可能一致,最好使用相应的等级实验动物,并符合所要培养病毒的要求;尽量使用遗传特性相似,个体差异较小,生物学反应比较一致的动物;外购动物,接种前要经过健康观察,以免误用带有病原体动物。 可根据病毒性质、材料性质和目的不同,采取皮下接种法、皮内接种、肌肉接种、静脉接种、腹腔接种法、脑内接种法。 二、禽胚培养 理想的禽胚为SPF鸡胚。常用非免疫鸡胚加以补充,这种蛋应无特定病原的母源抗体,否则会影响病毒在胚内增殖。此外,不同病原对禽胚的适应性也不同,如狂犬病和减蛋综合征病毒在鸭胚中比鸡胚中更易增殖,鸡传染性喉气管炎病毒只能在鸡和火鸡胚内增殖,实际应用时而加以严格选择。 常用的接种途径有绒毛尿囊膜法、尿囊腔法、羊膜腔法和卵黄囊法四种,根据不同的病毒和不同的目的采用适宜的接种途径。 鸡胚不同接种途径与收获比较 影响禽胚病毒增殖的因素 1.种蛋质量: SPF种蛋最理想,其次是非免蛋,普通种蛋不能用。 病原微生物:家禽有很多疫病可经垂直传递于鸡胚,这些病原体既可污染制品本身,又可影响接种病毒在鸡胚内增殖 母源