三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性研究-生态环境学报.DOC

PAGE 1782 生态环境 第17卷第5期（2008年9月） 王新新等：三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性 PAGE 1781 生态环境 2008, 17(5): 1778-1783 Ecology and Environment E-mail: editor@ 基金项目：国家自然科学基金项目；国家重点基础研究发展规划(973)项目(2004CB418505) 作者简介：王新新(1983年生)，男，硕士研究生，主要从事环境微生物学方面的研究。E-mail: wangxx2005@ *通讯作者 收稿日期：2008- 三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性 王新新1,2，张颖1*，韩斯琴1，王元芬1,2，李慧1 1. 中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程重点实验室，辽宁 沈阳110016；2. 中国科学院研究生院，北京 100049 摘要：三氯乙烯是一种具有“三致”效应的有机氯代烃化合物，作为一种重要的化工原料在工业上广泛应用，同时也造成了大量的三氯乙烯进入自然环境，引起了严重的环境污染。为获得更为丰富的三氯乙烯降解微生物资源，利用水-硅油双相系统从实验室高浓度三氯乙烯胁迫底泥中，分离筛选得到两株三氯乙烯降解菌WF1、FT10。在三氯乙烯初始质量浓度为5 mg·L-1的条件下，培养72 h，菌WF1、FT10对三氯乙烯的降解率分别为53.36%、48.06%；在500 mg·L-1乙酸钠作为共代谢基质的情况下，降解率分别为55.95%、55.62%，降解速率明显提高。根据形态学观察、16项生理生化实验和16S rRNA序列分析结果，将菌株WT1归为Achromobacter xylosoxidans，将菌株FT10归为Sporosarcina aquimarina。对菌株培养条件进行优化，经SlideWrite统计软件拟合，菌株WT1和FT10在牛肉膏蛋白胨液体培养基上的最适生长温度分别为33.7 ℃和 关键词：三氯乙烯；降解菌；分离鉴定；底泥；无色杆菌；八叠球菌 中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（2008）05-1778-06 三氯乙烯是一种易挥发的有机氯代烃化合物，作为一种优良的溶剂广泛应用于多个行业。由于不合理的废水排放和意外泄露，它被大量释放到环境中，成为底泥水体中常见的污染物之一[1]。因其分布广泛且具有致畸、致癌、致突变等潜在危险[2-3]，许多国家都已将其列入优先控制污染物黑名单[4]，因此探索高效便捷的处理方式具有重要意义。利用微生物降解三氯乙烯的方法具有去除率高、成本低等优点，因而在三氯乙烯污染治理中备受关注[5-6]。目前国际上已经分离到了可以降解三氯乙烯的多种微生物，主要有Pseudomonas、Methylocystis、Xanthobacter、Methylosinus、Desulfuromonas、Alcaligenes、Ralstonia、Burkholderia、Mycobacterium、Janibacter、Nitrosomonas等[7-10]，然而国内三氯乙烯污染治理相关的研究甚少，三氯乙烯降解菌方面的研究更为罕见。本研究从实验室高浓度三氯乙烯污染底泥中，经富集驯化筛选得到两株三氯乙烯降解菌，通过菌种鉴定确定其分类地位，并探索了降解菌的最适培养条件，以期为修复三氯乙烯污染提供理论依据。 1 实验材料与方法 1.1 仪器 GNP-9080型恒温培养箱、GLC-3型超净工作台、LDZX-40型自动高温灭菌锅、HZQ-C型气浴恒温摇床、PTC-100TM型PCR仪、GENIE-2型旋涡混合器、5415 C型高速离心机、DYY-6B型电泳仪、Bio-Rad凝胶呈像系统、XSP-8CZ型显微镜、752型紫外可见分光光度计、Agilent?6890气相色谱仪。 1.2 实验材料 主要试剂：三氯乙烯、硅油（聚甲基硅醇）、蛋白酶K、TaKaRa Agarose Gel DNA Purification试剂盒、10×PCR Reaction Buffer、10 mM dNTP Mixture、Taq DNA聚合酶。 无