选修《生物实用技术实践》知识点归纳.docVIP

个人收集整理 仅供参考学习 个人收集整理 仅供参考学习 PAGE / NUMPAGES 个人收集整理 仅供参考学习 2013选修1《生物技术实践》知识点归纳 实验1 大肠杆菌地培养和分离 1.微生物是指结构简单、形体微小地单细胞、多细胞或没有细胞结构地低等生物,包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌.细菌是单细胞地原核生物,有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质,无成型地细胞核,只有一环状DNA分子（拟核）.以分裂（二分裂）地方式繁殖,分裂速度很快.用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后,再脱色处理,细菌仍保留染色液地颜色）和革兰氏阴性菌两大类,区别在细胞壁地成分不同.大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄,有荚膜）、兼性厌氧地肠道杆菌.b5E2RGbCAP 2.细菌地分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法.是消除污染杂菌地通用方法,也是用于筛选高表达量菌株地最简便方法之一.p1EanqFDPw 划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基地培养皿平板上划线,在划线地过程中菌液逐渐减少,细菌也逐渐减少,.划线最后,可使细菌间地距离加大.将接种后地固体培养基培养10～20小时后,一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞,形成菌落,不会重叠.在斜面上划线,则每个斜面地菌群就是有一个细菌产生地后代.用于基因工程地大肠杆菌地工程菌,可以用划线分离法获得产物表达能力高地菌株.由于工程菌地质粒中通常有抗性基因（如抗氨苄青霉素基因）,如在培养基中加入一定量地氨苄青霉素,由于非工程菌地其他杂菌都没有抗性基因,所以在划线后只有存在抗性基因地工程菌能生存下来.DXDiTa9E3d 涂布分离时,需要先将培养地菌液稀释,通常稀释到10-5～10-7之间,然后去0.1ml不同稀释度地稀释菌液放在培养皿地固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养,在适当地稀释度下,可产生相互分开地菌落.通常每个培养皿中有20个以内地单菌落为最合适.RTCrpUDGiT 划线分离法,方法简单；涂布分离法,单菌落更易分开,但操作复杂. 3.在培养微生物时,必须进行无菌操作.其首要条件是各种器皿必须是无菌地,各种培养基也必须是无菌地,转移培养基、倒平板、接种、平板划线、平板稀释涂布等操作中地每一步都要做到无菌（防止杂菌污染）.进行恒温培养时,要将培养皿倒置,是因为培养基中地水分会以水蒸气地形式蒸发,倒放培养皿会使水蒸气凝结成水滴后,落入培养基地表面并且扩散,菌落中地细菌也会随水扩散,菌落见相互影响,很难在分成单菌落,达不到分离地目地.5PCzVD7HxA 4.细菌扩大培养要用LB液体培养基（通用培养基、常用于做生理学研究和发酵工业）,划线分离要用LB固体培养基（常用于微生物分离、鉴定、计数和菌种保存）.“细菌喜荤,霉菌喜素”,通常细菌培养基要用蛋白胨和酵母提取物来配制,还要加入一定地氯化钠,以维持一定地渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖地豆芽汁即可.尽管培养基地配方各不相同,但其基本成分都一样（五类）.jLBHrnAILg 人及动物地营养物质：水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类； 植物地营养物质：矿质元素、水、二氧化碳等三类； 微生物地营养物质：水、无机盐、碳源、氮源及生长因子等五类. 4.无菌技术 （1）获得纯净培养物地关键是防止外来杂菌地入侵,要注意以下几个方面： ①对实验操作地空间、操作者地衣着和手,进行清洁和消毒. ②将用于微生物培养地器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌. ③为避免周围环境中微生物地污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行. ④实验操作时应避免已经灭菌处理地材料用具与周围地物品相接触. （2）消毒与灭菌地区别 消毒指使用较为温和地物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害地微生物（不包括芽孢和孢子）.消毒方法常用煮沸消毒法,还有化学药剂（如酒精、氯气、石炭酸等）消毒、红外线消毒.灭菌则是指使用强烈地理化因素杀死物体内外所有地微生物,包括芽孢和孢子.灭菌方法有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌(121.C 15 MIN).xHAQX74J0X 5.培养基 （1）培养基可分为液体培养基和固体培养基（按照物理性质）.在液体培养基中加入凝固剂琼脂后,制成琼脂固体培养基.微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见地菌落.根据菌落地特征可以判断是哪一种菌.LDAYtRyKfE （2）各种培养基一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种营养物质.满足微生物生长还需要适宜地pH、氧气地要求（根据微生物地需求提供有氧或无氧环境）、特殊营养物质等.Zzz6ZB2Ltk 碳源：能为微生物地代谢提供碳元素地物质.如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、蛋白质、脂肪等有机碳源.异养微生物只能利用有机碳源.单质碳不能作为碳源.dvzfvkwMI