凝血酶调节蛋白基因-中华血液学杂志.PDFVIP

· 162· 血液学杂志2006年 且筮 !鲞筮 塑 』旦 !2 ： - 论 著 - 凝血酶调节蛋 白基因 对脐静脉 内皮细胞抗凝功能的调控 戴毅 陈开 乔正荣 邹琳 张雪梅 陈辉 时德 摘【要】 目的 将含人凝血酶调节蛋白(hTM)基因的真核表达载体质粒pcDNA3．I／hTM转染体 外培养的脐静脉内皮细胞(HUVECs)。观察外源凝血酶调节蛋白的表达及其所致的HUVECs抗凝功能 的改变。方法 由阳离子脂质体介导将pcDNA3．1／hTM质粒转入内皮细胞中，半定量RT-PCR测定各 组hTMmRNA的表达强度；免疫组化法检测 hTM在内皮细胞膜．I-的表达；测定各组内皮细胞对蛋白c (PC)的激活；半 自动凝IfL【仪测定内皮细胞 Pc反应液对正常血浆活化部分凝血活酶时间(APrr)和凝 血酶原时问(PT)的影响。结果 HUVECspeDNA3．1／hTM质粒转染率约为 10％，TMmRNA和TM蛋 白的表达强度都有明显提高。重组质粒转染组、空载质粒组及未转染组Pc反应液中活化蛋白C(acti— vatedproteinC，APC)的含量分别是(2．80±0．43) ml、(0．75±0．08) ml、(0．85±0．11) l11l。 AP，IrI值在重组质粒转染组、空载质粒组、未转染组、未激活 Pc组和正常对照组中分别为(51．68± 2．73)s、(38．38±2．44)s、(39．65±2．39)s、(33．93±1．73)s和(34．60±1．86)s。PT值在各组中分别 为(21．89±1．66)s、(20．56±1．74)s、(20．42±2．04)s、(19．57±1．36)s和 (20．16±1．35)s。结论 pcDNA3．I／hTM质粒能被导人内皮细胞中。表达的TM分子具有生物学活性 ，能明显提高对 Pc的激 活。激活的Pc能明显抑制血浆内源性凝血途径使APIT延长，也使外源性凝血途径受到轻度抑制。 【关键词】 血栓调节蛋白； 蛋白质 C； 内皮细胞；转基 Regulationofanficoagulationeffectofhumanumbilicalveinendothelialcellsbythrombomodulingene transfection DAI ，CHENKai，QIAOZheng—rong，ZOULin，ZHANGXue—Mei，CHENHui，SHIDe． DepartmentofVascularSurgery，TheAffiliatedHospital，NorthSichuanMedicalCollege，Nanchong 637000，China 【Abstract】 objective TotransfectpcDNA3．1／hTMplasmidscontaininghumanthrombomodulin (hTM)geneintohumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)。andinvestigatetheexpressionofhTM andantieoagulatingfunctionoftransfectedHUVECs．Methods HUVECsweretransfectedwithpcDNA3．1／ hTM bylipofeetin．ExpressionofhTM mRNA wasdeterminedbysemi-quantitativeRT—PCR，hTM antigenon HUVECsmembranebyimmunohistochemistry。andactivatedproteinC (PC)inHUVECsbyehromometry． Byusingasemiautomaticcoagulator，theeffectofthereactingliquidfrom transfectedHUVECsmixedwithPC rfomnomr alperipheralbloodwasassayed．Results About10％ HUVECsweretransfectedbypcDNA3．1／ hTM withhigh-levelhTM mRNAandproteinexpression．ActivatedPC