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* 专题八 生物技术实践 核心要点突破 一、微生物的培养与应用 1.微生物的实验室培养 (1)培养基 ①概念:人们按照微生物对营养物质的不同需求,配制出供其生长繁殖的营养基质。 ②分类和应用 ③制备:计算→称量→溶化→灭菌→倒平板。 (2)无菌技术 主要是为了防止外来杂菌的入侵,重点是消毒和灭菌。 ①消毒和灭菌的区别 灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌 杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子 强烈的理化因素 灭菌 煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物(不包括芽孢和孢子) 较为温和的物理或化学方法 消毒 常用的方法举例 结果 使用方法 ②三种常用灭菌方法的比较 15 min~30 min 100 kPa,121 ℃ 培养基等 高压蒸 汽灭菌 1 h~2 h 干热灭菌箱内,160 ℃~170 ℃ 玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等 干热 灭菌 直至烧红 酒精灯火焰的充分燃烧层 接种环、接种针或其他金属工具 灼烧 灭菌 灭菌时间 灭菌条件 适用材料或用具 灭菌 方法 (3)微生物的纯化培养 包括培养基的制备和纯化微生物两个阶段,纯化微生物时常用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。 平板划线法和稀释涂布平板法的比较 2.微生物的分离和计数 (1)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ①筛选菌株:利用选择培养基筛选菌株。 ②测定微生物数量的常用方法: 统计菌落数目和显微镜直接计数。 ③过程:土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察。 (2)分解纤维素的微生物的分离 ①实验原理 即:可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 ②流程:土壤取样→选择培养→梯度稀释→涂布平板→挑选菌落。 二、传统发酵技术的应用 1.果酒、果醋、腐乳、泡菜制作中所用菌种及控制条件的比较 2.果酒、果醋、腐乳和泡菜制作过程比较及亚硝酸盐含量的检测 三、植物有效成分的提取 1.植物芳香油三种提取方法的比较 适用范围广,要求原料的颗粒要尽可能细小,能充分溶解在有机溶剂中 ①粉碎、干燥②萃取、过滤③浓缩 使芳香油溶解在有机溶剂中,蒸发溶剂后就可获得芳香油 有机溶剂萃取 适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料中芳香油的提取 ①石灰水浸泡、漂洗②压榨、过滤、静置③再次过滤 通过机械加压,压榨出果皮中的芳香油 压榨法 适用于提取玫瑰油、薄荷油等挥发性强的芳香油 ①水蒸气蒸馏②分离油层③除水过滤 利用水蒸气将挥发性较强的植物芳香油携带出来 水蒸气蒸馏 适用范围 方法步骤 实验原理 提取方法 2.实验流程设计 (1)玫瑰精油的提取实验流程 (2)橘皮精油的提取实验流程 石灰水浸泡橘皮―→漂洗―→压榨―→过滤―→静置―→再次过滤―→橘皮油。 (3)提取胡萝卜素的实验流程 胡萝卜―→粉碎―→干燥―→萃取―→过滤―→浓缩―→胡萝卜素。 四、植物的组织培养技术 1.原理:细胞的全能性 (1)植物体内已分化的细胞,在离体状态和一定的条件下,可以发育成完整的植株,其过程如下: (2)影响植物组织培养的因素 ①内因:植物的种类,同一种植物材料的年龄、保存时间的长短、部位等。 ②外因:MS培养基中的营养物质和PH、温度、光照等环境条件。 ③植物激素:生长素用量/细胞分裂素用量影响细胞分裂、分化,该比值较高时,有利于根的分化、抑制芽的形成;该比值较低时,有利于芽的分化、抑制根的形成;该比值适中时,促进愈伤组织的形成。 2.植物茎的组织培养与花药植株的产生的比较 3.植物组织培养技术、微生物培养技术和无土栽培技术的比较 作要求 适宜的环境条件,基质垫底并固定幼苗,不需要保证无菌条件 严格控制无菌操作,整个培养过程无需更换培养基 严格控制无菌操作,在培养过程中要更换培养基,调节细胞分裂素和生长素的比例 特殊操 水、必需矿质元素 水、无机盐、碳源、氮源等 水、矿质元素、蔗糖、维生素、有机添加物和植物激素等 培养基成分 将植物生长发育过程中所需各种矿质元素按一定比例配成营养液,并利用这种营养液栽培植物 在无菌条件下,在适宜的营养和环境条件下对微生物的培养 在无菌条件下,将离体的植物体器官或组织接种在适当的培养基上进行培养,最终发育成完整植物体 含义 无土栽培 微生物培养 植物组织培养 三种技术中均需要一定的营养物质,但营养物质的划分标准不同。 五、酶的研究与应用 1.果胶酶在果汁生产中的作用 (1)果胶酶的作用:分解细胞壁及胞间层的主要成分——果胶,使其变成可溶性的半乳糖醛酸,易于榨取果汁。 (2)酶的活性与影响酶活性的因素 ①酶的活性是指酶催化一定化学反应的能力。酶反应速度用单位时间内、单位体积中反应物的减少量或产物的增加量表示。 ②影响酶活性的因素有温度、pH和酶的抑制剂等。 2.探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 (1)加酶洗衣粉中含有的常用酶制剂:蛋白酶、脂肪酶、
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