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根据各类微生物的形态结构特点和新陈代谢类型,利用选择培养基和鉴别培养基,结合显微镜镜检,以及菌落特征,可以把混杂在一起的大肠杆菌、硝化细菌、乳酸细菌、酵母菌、金黄色葡萄球菌、圆褐固氮菌分离开来。下面是分离筛选的方法步骤,请根据各个步骤的条件,填写空格中的内容: 首先配制一系列不同性质的固体培养基,然后进行高温灭菌。再将上述微生物的混合液分别接种到各种培养基上培养。 例2 (1)用无氮培养基可筛选出_____________________________________。 (2)用不含有机碳源的选择性培养基可筛选出_____________________________________。 (3)酵母菌的筛选需要在常规培养基中另加入______________________________________。 (4)用加了较高浓度NaCl的培养基可选择出_______________________________________, 或者根据菌落的颜色呈现________色,将其挑取单独培养。 (5)利用伊红—美蓝培养基培养混合菌,菌落呈______色并带有金属光泽的是____________,挑取该菌落单独培养。结合显微镜镜检和进一步用伊红—美蓝培养基鉴别来确定。 (6)在无氧环境下培养混合菌,_________________________________________ 可以生长。加入一定浓度的乳酸,使培养基pH充分降低,可抑制____________微生物的生长,利用菌落特征,结合显微镜镜检,选取生长优势的菌落,即可分离出____________。 【尝试解答】 (1)圆褐固氮菌 (2)硝化细菌 (3)青霉素 (4)金黄色葡萄球菌 桔红(金黄) (5)绿 大肠杆菌 (6)大肠杆菌、乳酸细菌、酵母菌 大肠杆菌和酵母菌 乳酸细菌 【解析】 若培养基中无氮,则凡是不能自生固氮的微生物均不能生存,题中所列微生物中,只有圆褐固氮菌能固氮,因而无氮培养基可选出该菌;若用不含有机碳的培养基则可选出自养型微生物;真菌的筛选可在培养基中加入青霉素;高浓度NaCl可选出耐盐微生物,如金黄色葡萄球菌;用伊红—美蓝培养基可鉴定大肠杆菌;在无氧环境中,厌氧型及兼性厌氧型微生物才能生长,需氧型微生物将被抑制。 【规律方法】 判定培养基的类型及培养微生物的生活方式的方法: ①培养基中是否含有有机物:若有,则培养的微生物为异养型微生物;若无,则培养的微生物为自养型微生物。 ②是否含有琼脂:若有,则该培养基为固体培养基。 ③是否含有一些特殊物质:若含有青霉素、高浓度盐等,用于抑制不需要的微生物的生长,而促进所需微生物的生长的培养基为选择培养基;若含有伊红—美蓝等,用于区分不同微生物种类的培养基为鉴别培养基。 跟踪训练 在培养微生物的培养基中加入某些物质能分离出所需的微生物。下列选项中,前者是在培养基中加入的物质,后者是能被分离出的微生物,其中正确的是( ) A.氢氧化钠,酵母菌 B.盐酸,放线菌 C.适量的青霉素,霉菌 D.适量的伊红-美蓝,大肠杆菌 解析:选C。氢氧化钠、盐酸为强碱、强酸,酵母菌和放线菌都不能生存,加入伊红-美蓝的培养基是用来鉴定大肠杆菌,并不能分离大肠杆菌。适量的青霉素对原核生物有抑制作用,对真核生物的生命活动并不影响。 1.概念:无菌技术不仅能防止实验室的培养物被其他外来微生物污染,保持微生物的纯培养,而且在分离、转接时亦能防止其他微生物污染。获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开,主要包括以下几个方面: 无菌技术 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。双手用肥皂洗净,擦干后用75%酒精消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。培养基用高压蒸气灭菌。接种环用火焰灼烧来灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2.灭菌与消毒 (1)几种常用灭菌方法的比较 方法 适用材料或用具 灭菌条件 灭菌时间 灼烧灭菌 接种环、接种针或其他金属工具 酒精灯火焰的充分燃烧层 直到烧红 干热灭菌 耐高温且需保持干燥的物品,如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等 干热灭菌箱内160~170 ℃ 1~2 h 高压蒸汽灭菌 培养基 100 kPa、121 ℃ 15~30 min (2)消毒属于部分灭菌。常用的消毒方法有:煮沸消毒法和化学消毒法。 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽灭菌锅、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理,这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( ) A.接种环、手、培养基 B.高压锅、手、接种环 C.培养基、手、接种环 D.接种环、手、高压锅 【
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