超衍射极限相干反斯托克斯拉曼散射显微成像技术中空心-物理学报.PDF

物理学报 Acta Phys. Sin. Vol. 63, No. 21 (2014) 214601 超衍射极限相干反斯托克斯拉曼散射显微成像 技术中空心光束的形成 刘双龙 刘伟 陈丹妮 牛憨笨 (深圳大学光电工程学院, 光电子器件与系统(教育部/广东省) 重点实验室, 深圳 518060) ( 2014 年4 月10 日收到; 2014 年6 月25 日收到修改稿) 空心光束的质量是超衍射极限相干反斯托克斯拉曼散射显微成像技术中决定成像质量的一个至关重要 的因素. 本文基于菲涅耳衍射理论, 分析了螺旋相位片法产生空心光束的物理机理, 并且模拟了不同的入射 条件对产生的空心光束的影响. 模拟结果表明: 波长与相位片中心波长匹配且光强呈圆对称分布的高斯光垂 直入射到相位片上, 当高斯光束中心与相位片中心完全对准时, 可获得较理想的空心光束; 入射光光强分布的 圆对称性以及入射光中心与相位片中心的对准程度都会影响产生的空心光束的强度分布; 同时, 高斯光束小 角度倾斜入射时, 空心光的强度分布仍呈圆对称, 却在观察面发生一定的位移; 此外, 入射光中心波长偏离相 位片中心波长不大时, 对产生的空心光束的强度分布几乎没有影响. 上述分析结果对用于超衍射相干反斯托 克斯拉曼散射显微成像技术中理想空心光束的获取具有重要的指导意义. 关键词: 空心光束, 超衍射极限, 相干反斯托克斯拉曼散射, 螺旋相位片 PACS: 46.40.Cd, 42.65.Dr, 42.65.–k DOI: 10.7498/aps.63.214601 内精细结构的观察成为可能, 这些荧光超分辨显 1 引 言 微成像技术包括: 光敏定位显微(photo-activated localization microscopy, PALM)3 、随机光学重建 反映生命体性质的特征尺度都在纳米量级, 远 显微(stochastic optical reconstruction microscopy, 远超过常规光学显微镜横向约200 nm、轴向约500 STORM)4 和受激发射损耗法(stimulated emis- nm 的空间分辨率极限1 . 虽然原子力显微镜、电 sion depletion, STED)5 等. 以上基于荧光标记的 子显微镜等可以实现纳米量级的分辨本领, 然而 超分辨显微成像技术由于荧光标记物的引入, 不可 电子显微镜所需要的真空环境不利于生物样品的 避免对活细胞引起毒性, 同时荧光团自身的光致漂 存活, 因而无法用于活细胞成像, 原子力显微镜和 白和光损伤都是无法回避的问题. 因此我们亟需 2 摆脱荧光方法的束缚, 发展一种无需标记, 同时具 扫描隧道显微镜仅限于对样品表面成像 , 无法观 察细胞的内部结构. 因此, 人们迫切希望拥有一种 有良好化学特异性和探测灵敏度的新型显微成像 既具有纳米尺度的空间分辨率, 又可以监测活细 技术. 胞内分子运动和结构变化的显微成像技术. 近些 相干反斯托克斯拉曼散射(coherent anti- 年来, 随着新型荧光标记物的出现以及成像方法 Stokes Raman scattering, CARS) 显微成像技术 的改进, 荧光显微成像技术的分辨率得到极大提 可以在无需外援性标记的情况下, 根据物质分子的 高, 能够达到10—20 nm 空间分辨率, 从而使细胞 振动或者转动特性获取待测样品的