基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定-药学学报.PDFVIP

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2019-03-29 发布于天津
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基于报告基因的抗CD20单克隆抗体ADCC生物学活性测定-药学学报.PDF

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94 药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 15, 50 ( 1): 94 98 于报告基因的抗CD20 单克隆抗体ADCC 生物学活性测定方法的建立 1 1 * 刘春雨 , 王兰 , 郭玮, 于传飞, 张峰, 王文波, 李萌, 高凯 ( 中国食品药品检定研究院, 北京 100050) 摘要: 利用 Jurkat/NFAT-luc + Fc RIIIa 转基因细胞系作为效应细胞, WIL2-S 细胞系作为靶细胞, 通过荧光素酶检测系统 (BioGloTM Luciferase Assay System) 进行抗CD20 单抗的ADCC 生物学活性检测, 并对实验条件进行优化及方法学验证。结果显示抗CD20 单抗在该方法中存在量效关系, 且符合四参数方程式: y = (A D) / [1 + B 1 (X/C) ] +D 。方法经优化确定靶细胞为WIL2-S 细胞, 抗体稀释浓度为 18 000 ng ·mL , 1 ∶5 倍的稀释倍数, 效靶比为6 ∶1, 诱导时间为6 h 。该方法具有良好的专属性, 8 次独立实验的回归分析、线性及平行性均通过统计学检验; 4 个不同稀释组回收率样本经3 次测定, 相对效价分别为 (44.39 ±3.93) %、(72.74 ±2.78) %、(128.28 ±7.01) % 和 (168.19±2.70) %, 变异系数均小于10%, 对应回收率分别为 (88.78 ±7.85) %、(96.99 ±3.70) %、(102.63 ±5.61) % 和 (112.12± 1.80) % 。本研究利用转基因细胞法成功建立抗CD20 单抗ADCC 生物学活性检测方法, 该方法专属性强、重复性好, 准确性高, 可作为抗CD20 单抗ADCC 生物学活性的常规检测方法。关键词: 抗CD20 单克隆抗体; ADCC; 生物学活性中图分类号: R9 17 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (20 15) 0 1-0094-05 Development of a novel reporter gene method for determination of ADCC potency of anti-CD20 monoclonal antibody 1 1 LIU Chun-yu , WANG Lan , GUO Wei, YU Chuan-fei, ZHANG Feng, WANG Wen-bo, * LI Meng,