多肽自组装膜用于凝血酶的检测-分析化学.PDFVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第7 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年7 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1044 ~1048 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.140136 多肽自组装膜用于凝血酶的检测 李淑淳摇 李 芳摇 刘 斌摇 孙向英* (华侨大学材料科学与工程学院,厦门361021) 摘摇 要摇 利用自组装膜技术在石英片表面构建了多肽自组装膜。 考察了组装液浓度和组装时间对多肽自组 装膜组装效果的影响,并用紫外可见吸收光谱仪和扫描电镜对该膜进行了表征。 研究结果表明,当酌鄄氨基丙 -4 基三乙氧基硅烷水溶液浓度为1% (V/ V),组装时间为3h;金纳米浓度为2.4 伊 10 mol/ L,组装时间为12 h; -4 多肽浓度为1伊 10 mol/ L,组装时间为12h时,组装效果最好。 基于凝血酶可特异性酶切多肽中精氨酸和甘 -12 氨酸之间的肽键,建立了一种测定微量凝血酶的新方法,方法的线性响应范围为 2. 8伊10 ~9.9伊 -10 -12 10 mol/ L,检出限为1.4伊10 mol/ L。 此膜用于血清样品中凝血酶的测定,回收率为91.6% ~107.6%。 关键词摇 多肽; 自组装膜;凝血酶;荧光;金纳米 1摇 引摇 言 [1] 凝血酶在血液凝固、炎症、贫血、创伤愈合等生理及病理过程中发挥着重要作用 ,因此对其检测 [2] [3] 具有重要意义。 目前,许多方法已成功地应用于凝血酶的检测,包括化学发光法 、荧光法 、光度 [4] 法 等,然而这些方法多采用核酸适配子作为识别单元,需要在核酸适配子上修饰信号分子,使得这些 方法比较复杂,且成本较高,并且大多是在纯液相中检测。 自组装膜(SAMs)是分子通过化学键相互作用自发吸附在固鄄液或气鄄固界面而形成的热力学稳定 和能量最低的有序膜。 由于其具有结构简单、膜均一稳定以及制备相对容易等特点而备受关注[5~8]。 多肽可以通过自组装膜技术固定到多种基质上,并且可以用于实时动态监测相关蛋白酶的活性[9~12]。 将自组装膜技术引入到实时监测蛋白酶活性的传感器中,拓宽了其研究和应用的范围。 本研究设计一端为有荧光特性的色氨酸残基,另一端含有一个半胱氨酸残基且具有凝血酶酶切位 点的多肽(Peptide),通过 Au S 键的作用将多肽组装到 Quartz/ APES/ AuNP SAMs 上,制得 Quartz/ APES/ AuNP/ Peptide复合薄膜。 利用金纳米能显著猝灭Peptide SAMs 上色氨酸的荧光,而加入凝血酶 后,凝血酶能特异性酶切多肽中甘氨酸和精氨酸之间的肽键[9,11] ,从而使色氨酸残基从自组装膜表面脱 落进入溶液,自组装膜上金纳米与色氨酸距离的增大导致色氨酸荧光恢复(原理见图1),由此建立了一 种多肽自组装膜检测凝血酶的新方法。 与文献报道的方法相比,本方