圆形碘孢虫单链抗体库的筛选与阳性克隆特征分析-中国科学院水生.PDFVIP

第 32卷 第 4 期 水 生 生 物 学 报 Vol1 3 2, N o1 4 2 0 0 8 年 7 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SIN ICA Ju l1, 2 0 0 8 DO I号: 1013724 / SP1J1000012008140568 1 1 1, 2 1, 2, 3 1 章晋勇 汪建国 李 明 顾泽茂 龚晓宁 11 中国科学院水生生物研究所, 武汉 430072; 21 中国科学院研究生院, 北京 100039; 31 华中农业大学水产学院, 武汉 430070) : 噬菌体抗体库已成为单克隆抗体生成的重要技术之一。本文通过用圆形碘孢虫相关抗原对已构建的鼠源免 疫噬菌体展示单链组合抗体文库进行生物淘选, 并对几株相对亲和力较高的阳性单克隆序列特征、相对亲和力及 热稳定性等进行了分析。ELISA、间接免疫荧光及免疫印迹等进行特征鉴定。结果表明, 噬菌体抗体库技术对于分 离抗圆形碘孢虫不同表位抗原是可行的, 将为粘体动物的抗原物质及分布、寄生虫2宿主相互关系等研究提供丰富 的抗体来源。 : 圆形碘孢虫; 粘体动物; 噬菌体单链抗体; 生物淘选 : Q789 : A : 100023207 2008) 042 0568211 自 1825年 Jurine 首次报道粘体动物 粘孢子 操作简单、制备周期短、成本低、易大量表达、保存方 纲) 引起鱼类病害以来, 尽管人们在其分类、起源、 便等特点, 大有取代杂交瘤技术的趋势。噬菌体抗 系统发育、生活史、病理、寄生虫2宿主相互关系、诊 体库技术最显著的特点就是将抗体的基因型与表型 [ 1) 5 ] 有机的结合起来, 使得获得抗体的同时得到其编码 断、防治等诸多方面取得了很大的成就 , 但粘体 动物引起的病害依然是限制鱼类养殖业发展的重要 基因, 从而将抗体的性能改造, 如亲和力提高、增加 因子之一, 如寄生于鲫鱼 Carassius aruatusauratus) 热稳定性、分子量及效价的改变等变成简单的基因 [ 7, 29] 的 圆形碘 孢 虫 Myxobolus rotundus N em eczck 工程操作 。单链抗体 Single cha in fragm ent va2 19 11) [ 1, 6] 。抗体 多克隆/单克隆抗体) 由于其良好 riable, scFv)是有一条柔性链接肽将抗体的重链可变 [ 7] 区 VH )和轻链可变区 VL)连接在一起形成的两个 的特异性和高亲和力的特性 , 是病原的诊断、特 首尾相接的单一肽链, 通过正确的折叠, 从而使两个 征分析及病害防治的良好试剂, 在粘体动物引起的 [ 8) 28] 可变区由非共价键形成完整的抗原结合区, 这样既增 病害方面也得到了广泛的应用 。多克隆抗体 加了抗体可变区的稳定性, 又有利于遗传操作, 是目 由于识别多个表位, 在具体分析单一抗原性质有其 [29] 前报道与应用最广泛的一种小分子抗体 。为深入 内在局限性, 而且用作诊断试剂不易控制本底值。 研究圆形碘孢