章细胞重组和克隆技术.ppt

第一节 细胞重组 一、胞质杂种 二、微细胞核移植 三、细胞核移植 四、细胞重建 第二节 克隆技术 一、克隆的定义和理论基础 二、克隆技术的发展概况 三、克隆的技术方法 四、克隆技术的意义及应用 五、正确看待克隆技术 六、克隆技术的设想 1、克隆的定义 “克隆”是从英文“clone”音译而来，它是利用细胞工程技术通过动物或植物的一个细胞而发育成的一个完整的个体。该个体并非是供体动物（体细胞提供者）的后代而是它的拷贝——即复制品。 多细胞生物体的每一个体细胞的细胞核内均还有发育成该生物体完整个体的所有遗传信息（染色体基因组），也就是说多细胞生物体的每一个体细胞都具有发育成完整个体的潜能，这就是细胞的全能性，也是克隆的理论基础。 理论依据：克隆技术所依赖的理论基础是细胞潜在全能性学说，是指细胞包含个体的全套遗传信息，并在特定环境因素的调节下，可回到受精卵一样的状态，并从头开始发育成一个完整的生物个体。只有具备全能性的动物组织细胞，才可用作克隆动物。 高等动物的大部分细胞核完整地保存着源于卵子和精子细胞核的全套遗传信息。 理论基础—在动物的发育过程中，具有全能性的受精卵需要不断分裂形成分化细胞。在细胞分化过程中，细胞核全能性的潜能不断得到限制。尽管核内的DNA序列没有发生任何变化，但是基因在特定的细胞内所表达的蛋白质成分是有限的。这主要是因为染色体组织改变和稳定阻遏核蛋白复合体阻遏以及相应转录激活的结果。这就是发育生物学中的渐成调控机制。对于发育来讲，这种阻遏作用是必要的。 体细胞克隆的成功，意味着卵子或卵母细胞逆转这种阻遏的过程,解除核组织的阻遏状态，使其恢复多能性，甚至全能性。 二 克隆技术的发展概况 1997年2月24日,英国罗斯林研究所试验成功的克隆羊多利，是首次利用体细胞克隆成功的，它在生物工程史上揭开了新的一页。 ??1998年7月22日：科学家采用一种新克隆技术，用成年鼠的体细胞成功地培育出了三代共50多只克隆鼠，这是人类第一次用克隆动物克隆出克隆动物。 2000年3月14日：曾参与克隆小羊多莉的英国PPL公司宣布，他们成功地培育出5只克隆猪，这是人类首次培育出克隆猪。 2001年1月，美国克隆猴成功，这只恒河猴被命名为“泰特拉”，这意味着克隆人已不存在技术障碍。 2002年3月30日法国农业研究所的科学家在《自然生物技术》杂志上发表研究报告，宣布首批克隆兔已经诞生。 2002年3月,美国科学家克隆成功猫. 2002年10月 中国农业大学采用胚胎冷冻技术获得的3头体细胞克隆牛。 2003年5月29日华盛顿消息，爱达荷大学的研究人员日前成功的在世界上首次克隆成功出一头被命名为“爱达荷宝石”的骡子，这项成果发表在《科学》杂志上。骡子是母马与公驴的杂交物种，这也是人类第一次成功克隆杂交物种。 中国成功克隆出的首批两只欧洲哥廷根医用小型猪，在天津宝迪祖代种猪场已成功地存活了9天。 据科研人员介绍，这两头克隆小型猪生长发育良好，体况活泼健康。出生重量分别为0.55公斤和0.6公斤，现在已长到1.9公斤和2.3公斤。 据介绍，欧洲哥廷根小型猪因其器官大小、结构和生理特点等与人的器官极为相似，已经成为国际上最理想的异种器官移植研究材料。目前，欧洲哥廷根小型猪作为糖尿病、心脏病、高血压、帕金森氏症等重大人类疾病的动物模型和新药筛选模型，得到了全世界医药管理机构的认可。 这项研究还首次在国际上成功实现了同一移植受体内进行不同品种和不同类型克隆胚胎的混合移植。 三 克隆的技术方法 克隆主要是指以细胞核移植为核心技术的无性繁殖操作技术。 1、细胞核移植 细胞核移植是指将不同发育时期的胚胎或成体动物的细胞核，经显微手术和细胞融合方法移植到去核卵母细胞中，重新组成胚胎并使之发育成熟的过程。 细胞核连续移植可以产生无限个遗传相同的个体。 细胞核移植是产生克隆动物的有效方法，故人们往往把它称为动物克隆技术。 用紫外光照射受精卵，破坏原来的细胞核； 取得另一个细胞的细胞核； 再用极细的玻璃针，重新将新的细胞核植入卵中。 其中破坏卵细胞核的目的是为了避免当细胞融合后，不会因为存有多余的染色体而影响细胞正常的生长及分裂。 2、克隆动物的一般制备技术 克隆可以通过不同来源的细胞核移植来实现，如胚胎细胞、干细胞、成纤维细胞、体细胞等。其中以胚胎细胞克隆的应用比较普遍，以体细胞克隆的意义最大。 胚胎细胞核移植法 将未着床的早期胚胎分散成单个的细胞球，在电流的作用下，使这些单个细胞与去除染色体的未受精的卵细胞融合。 克隆动物制备的一般过程： 核供体动物的选择与细胞核的获得→核受体动物的选择与细胞核的移出→供体核的移入及原核的取