10[安徽医大精品课程]生物化学第十章 DNA的生物合成教材编辑.ppt

; 复制(replication) 是指遗传物质的传代，以母链DNA为模板合成子链DNA的过程。;第一节;一、半保留复制的实验依据和意义;密度梯度实验; DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱基配对规律，合成与模板互补的子链。子代细胞的DNA，一股单链从亲代完整地接受过来，另一股单链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。;按半保留复制方式，子代DNA与亲代DNA的碱基序列一致，即子代保留了亲代的全部遗传信息，体现了遗传的保守性。;原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 ;A. 环状双链DNA及复制起始点 B. 复制中的两个复制叉 C. 复制接近终止点(termination, ter);;真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子的复制。 习惯上把两个相邻起始点之间的距离定为一个复制子(replicon) 。复制子是独立完成复制的功能单位。 ;5’;三、复制的半不连续性;顺着解链方向生成的子链，复制是连续进行的，这股链称为领头链。 另一股链因为复制的方向与解链方向相反，不能顺着解链方向连续延长，这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎片段(okazaki fragment)。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 ; DNA复制的酶学 The Enzymology of DNA Replication;参与DNA复制的物质 ;一、复制的化学反应 ;;聚合反应的特点;二、DNA聚合酶;5′ A G C T T C A G G A T A ? 3′ | | | | | | | | | | |;（一）原核生物的DNA聚合酶;;功能：对复制中的错误进行校读，对复制和修复中出现的空隙进行填补。;323个氨基酸;DNA-pol Ⅱ（120kD）;功能 是原核生物复制延长中真正起催化作用的酶。 ;（二）真核生物的DNA聚合酶;;三、复制保真性的酶学依据;（一）DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读;A：DNA-pol的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。 B：碱基配对正确， DNA-pol不表现活性。;（二）复制的保真性和碱基选择;1. 遵守严格的碱基配对规律； 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能； 3. 复制出错时DNA-pol的及时校读功能。;四、复制中的分子解链及DNA 分子拓扑学变化 ;（一）解螺旋酶和单链DNA结合蛋白; 解螺旋酶(helicase) ——利用ATP供能，作用于氢键，使DNA双链解开成为两条单链 引物酶(primase) ——复制起始时催化生成RNA引物的酶 ;单链DNA结合蛋白(single stranded DNA binding protein, SSB) ——在复制中维持模板处于单链状态并保护单链的完整;10;拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键;拓扑异构酶Ⅰ;;五、DNA连接酶;HO;DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。;（一）复制的起始;E.coli复制起始点 oriC;2）解螺旋酶解开双链; Dna A;引物酶;3?; 复制开始后由于DNA双链解开，在两股单链上进行复制，在电子显微镜下均看到伸展成叉状的复制现象，称为复制叉。 在DNA聚合酶III的作用下，新链第一个脱氧核苷酸就加到引物的3’-OH末端上，形成磷酸二酯键。复制开始。;（二）复制的延长; 5; 领头链的合成：DDDP沿着模板3’?5’滑动，第一个进入配对的dNTP与RNA引物上的3’－OH形成3’,5’－磷酸二酯键，留下3’－OH继续合成;; 两条链是在同一个DNA-polⅢ的催化下进行延长的过程;阶段一;阶段三;原核生物基因是环状DNA，双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。;5?;复制过程简图;哺乳动物的细胞周期;? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 ;3?;染色体