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D-二聚体的检测与临床应用 威士达医疗有限公司 辽宁地区经理 卢宏松 TEL2012.03.02 大连 内容提要 一、D-二聚体的产生 二、D-二聚体检测试剂的要求 三、标准化问题 四、Innovance D-Dimer 试剂 五、D-二聚体检测的临床应用 六、D-二聚体检测结果的解释 2 D-Dimer检测技术的发展史 1972年，Gaffney首先提出 D-Dimer检测，可作为监测凝血性疾病的“有用的工具”。 1983年，Rylatt等首先报道了用单克隆抗体（DD-3B6/22） 检测D-Dimer（乳胶凝集法）。当时被誉为“金标准”。 90年代 ，ELISA分析法、乳胶增强型免疫分析法等。 90年代末到本世纪初，免疫比浊法在凝血仪上实现了自动化检测。 3 凝血系统 内源性凝血 外源性凝血 凝血酶原 凝血酶 FXIII FXIIIa 纤溶酶原 纤溶酶 纤维蛋白单体 纤维蛋白原 交联纤维蛋白 FDP X,Y,D,E等碎片 X ′,Ｙ′,Ｄ,Ｅ等碎片 DD,DXD, DD/E,YXD等复合物 一、D-二聚体的产生 纤溶系统 纤溶 凝固 D-二聚体片段的异源性 5 fdp (源于纤维蛋白) 纤维蛋白（fibrin） Plasmin 6 FEU(340KD) DDU(190KD) 所检测的D二聚体片段 D-二聚体单克隆抗体的特异性 7 ★ 1983年，Rylatt等首先报道了用单克隆抗体（DD- 3B6/22）检测D-二聚体 ★目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用 ★各品牌试剂中的抗D-二聚体单克隆抗体是针对不 同分子量的纤维蛋白降解片段制备的，不同试剂 间差异非常显著 8 二、D-二聚体检测试剂选择 ●高度敏感性和NPV - (几乎) 无假阴性 ●有明确的阈值（cutoff值） 适用于24小时作常规分析 可用于门急诊标本分析 自动化检测 操作步骤简易 快速的报告时间 定量检测,有标准、质控物 经济 9 检测试剂盒 目前市场上用于检测D-二聚体的试剂品种有很多种，大体上可分为两种情况： 一种是以欧美产品为代表，主要用于DVT/PE排除筛查 特点：灵敏度高，检测范围相对较窄。 另一种是以日本产品为代表，主要是用于DIC诊断 特点：灵敏度相对较低，检测范围较宽 10 VTE(DVT/PE) exclusion DIC D-Dimer 无统一的国际标准 目前有超过30种检测方法和20多种单抗被使用。 存在两种报告单位： D-dimer（DDU）和纤维蛋白原当量(FEU) 抗体对D二聚体不同片段有不同的亲和力 不同的试剂有不同的干扰情况 11 三、标准化问题 12 美国临床实验室标准化协会（CLSI） H59-P推荐指南 13 D二聚体试剂标准——中国国家标准（讨论稿） 4.2 阴性预测值 结合临床诊断的验前概率进行D-二聚体检测，其阴性预测值应不低于95%。 4.3 测试范围 涵盖制造商提供的用于排除诊断的临界值的1/2到4倍的临床标本测定值。 4.4 线性 D-二聚体试剂在测试范围内，线性相关系数应大于0.98。 4.5 精密度 4.5.1 重复性 用正常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过15％，用高值异常质控血浆同日内重复测试所得结果的变异系数（CV）不超过10％。 …… 14 4.7 报告方式 D-二聚体的报告单位通常包括纤维蛋白原等量单位（FEU） 和D-二聚体单位（DDU）两种形式。FEU是将D-二聚体的量用 降解前纤维蛋白原分子的量来表达，因此，用FEU表达的D-二聚体的量相当于用DDU表达的1.7倍。在D-二聚体报告方式中还包 括ng/mL、ug/mL和mg/L等形式，通常应该直接采用制造商提 供的单位，不建议进行形式和量纲的转换 15 四、Innovance D-Dimer检测试剂 已通过美国FDA验证（FDA510K） 明确可用于静脉栓塞性疾病的排除，其阈值为0.5mg/L FEU 已得到EHA，ICTH和日本病理学会接受 2010年在中国成功注册 16 17 检测原理 全自动乳胶增强免疫比浊度法 新一代单克隆抗体8D3 检测系统 Sysmex® CA-7000 system Sysmex® CA-1500 system Sysmex® CA-560 system CS series 18 检测试剂 抗体试剂：REAGENT 乳胶颗粒包被 低压冻干，需蒸馏水复溶 稀释液：DILUENT 液体，用于样本稀释、定标稀释 有缓冲液作用 添加剂：SUPPLEMENT 液体，用于封闭非特异性抗体 缓冲液：