流式细胞术在血液学中的应用.docxVIP

髓过氧化物酶（MPO）是一种血红蛋白，它由两条53 kDa ffi链和两条15kDa轻链组成，英分子量为140 kD。每一个MPO分子包含两个起催化作用的非月元基吓咻。 MPO储藏于中性粒细胞的嗜天青颗粒中。MPO是中性粒细胞杀菌系统中的主要成分，它能催化氯离 子（Cl?）和过氧化氢（H2O2）生成强氧化剂次氯酸（HOCI）。在许多炎症反应中，MPO被释放到细胞外, 作为反映中性粒细胞活性的一个指标。激活的口细胞分泌MPO,其产生的过氧化物在宿主防御中起重要作 用。MPO与动脉粥样硬化等心血管疾病密切相关，MPO影响粥样斑块稳定性及血栓形成，MPO促进氧 化脂类（具细胞毒及促凝血作用）产生，同时耗竭NO引起血管收缩。 激活白细胞释放的MPO,在敏感的斑块中高表达并且具有催化活性，被认为是影响斑块的稳定性的 一个重要因素。MPO可作为预测急性冠脉综合症（ACS）指标。 血浆MPO水平可以在不考虑C反应蛋白及英它的炎症标志物的情况下独立预测心血管疾病的危险 性，血浆MPO水平可以预测急性局部胸痛病人6个月内患心肌梗塞及其他严重心血管疾病的危险性。更 重要的是，对于肌钙蛋白I （Troponin I）及肌钙黃白T （Troponin T）等经典检测排除心梗的患者，检测 MPO水平可以预测这些病人发生心梗等严東心血管疾病的危险性。 单一的血浆MPO检测能独立预测早期心肌梗塞的危险性，及在随后的1至6个月内发生严重心血管 疾病的危险性。与检测Troponin k TroponinT、CK-MB. C反应蛋白水平不同，MPO检测可预测无心肌 坏死的患者发生严重心血管事件的危险性，突出了它在预测胸痛病人出现心梗危险性的潜在作用。 一、流式细胞术在基础血液学中的应用 （一）血细胞的计数和分类研究 红细胞的计数、分类及其功能的研究 （1） 循环的红细胞总量的测定： 生物素一逆转抗生物素蛋白一FITC系统的特异性和流式细胞 仪（FCM）的敏感性 结合起来，建立了 FCM测定人红细胞总量的方法，此方法具有标本用量少，无放射性的优点, 适用于儿童和孕妇测定循环红细胞总量。 （2） 网织红细胞总数： 外周血网织红细胞计数（百分数和绝对值）是一反映骨髓红系增生活性的常用指标。 许多学者先后提出应用FCM和不同的RNA特异性荧光染料自动计数网织红细胞的方法，如派 若宁Y、A0＞澳化乙噪、thiazole orange等。 目前最普遍应用的是 thiazoie orange 染色法，这种特异性RNA 的激发波 （488nm）测量的特点，与人工计数法相比，它不但能得到网织红细胞的百分数和绝对值， 而且还能获得网织红细胞成熟指数（RMT） o RMT是一个检测骨髓功能的独立实验室指标， 它与网织红细胞内RTA含量成正比，RMT可成功地用于评价骨髓移植的效果。 目前，FCM检测网织红细胞主要用于 1） 预测骨髄移植的效果； 2） 解释各种红系增长低下性贫血的发病原因； 3） 评价某些新的重组生物制剂的治疗效果。 白细胞计数、分类及其功能的研究 （1） 白细胞计数和分类 FCM方法避免常规染色过程中，由于细胞漂洗和分类溶解所致的人工假彖，提供了 可靠的评价血液状态的第一手资料，并进一步筛选细胞亚群、测定其他参数。LDS-751.CD45. thiazole orange （2） 中性粒细胞的功能 FCM可在单个细胞水平上定量测定中性粒细胞的功能变化，有助于了解白细胞在感 染性疾病、白身免疫性疾病、恶性疾病的作用和诊断意义。 （3）血小板功能的研究： FCM可检测血小板膜抗原,如CD41a、CD42b、CD36、CD62p、CD63等。应用流式细 胞术检测这些单克隆抗体的变化可用于： a、 评价血小板功能状态； b、 探测循环血液屮激活的血小板； c、 探测血小板自身抗体。 如对原发性血小板减少性紫瘢、慢粒急变和再障病人的血小板自身抗体的检测中发 现，病人均可探测到IgM型自身抗体，有的病人可同吋伴有IgM或IgA自身抗体，后者血小 板减少更明显。因此，IgG血小板免疫荧光检查是检测自身免疫反应的敏感和特异指标，它 可直接测定自身免疫性血小板减少病人的血小板表面免疫球蛋白，进行血小板交义配型，以 此为有口身免疫反应的病人选择合适的供血者。 （二）正常骨髓各系血细胞特点的研究 造血干细胞的特点： FCM多参数分析可以探测常规形态检杳方法不能确认的造血干细胞。 红细胞系统的特点： FCM系统地观察了红系统表面特异性抗原（Hie-1、CD71和Glycophorin A）核酸 及红细胞体积的变化來研究红系在正常骨髓分化成熟的规律。Glycophorin A常作为红细 胞晚期的特征，出现在有核红细胞，此吋可与体积相似的淋巴细胞进行鉴别， Glycophorin A在成熟红细