抗生素发酵工艺.pptVIP

四、树脂法 离子交换技术是根据物质的酸碱度、极性和分子大小的差异予以分离的技术。 优点：成本低、操作方便、设备简单、提炼效率高、节约大量有机溶剂 1、离子交换原理 具有孔隙度 酸碱功能基团 2、离子交换树脂的结构与分类 结构：骨架和活性基团 分类：阳离子交换树脂 阴离子交换树脂 选择性离子交换树脂 两性离子交换树脂 吸附树脂 电子交换树脂 3、树脂和操作条件的选择 选择原则：强碱性离子一般选用弱酸性树脂；弱碱性离子宜用强酸性树脂；大分子离子，选择交联度较低的树脂。 操作条件： PH值：产物稳定的前体下产物离子化以及树脂解离 树脂类型：弱酸性和弱碱性树脂采用钠型或氯型 产物浓度：低价离子浓度有利于交换树脂，高价离子稀释时易被吸附。 洗脱条件：碱性条件下吸附，解吸应在酸性条件下进行。 二、微生物工程下游加工过程的特点 1、起始浓度较低而杂质又较多，最后成品要求达到的纯度又较高，因此常需多步纯化操作。 2、欲提取的生物物质通常不稳定，遇热、极端PH值、有机溶剂会引起失活或分解。 3、发酵或培养都是分批操作，且微生物总有一定的变异性，故各批发酵液不尽相同。 三、微生物工程下游加工的一般过程和单元操作 1、发酵液的预处理和固液分离（凝聚和絮凝） 2、初步纯化（提取：沉淀、吸附、萃取） 3、高度纯化（精制：层析、离子交换） 4、最后纯化（成品加工：浓缩、结晶、干燥） 第二节 发酵液的预处理及固液分离 目的：达到固液分离 根据活性物质的许可范围，可以采取酸化、加热、过滤、絮凝、离心等方法 一、发酵液的预处理 1、高价无机离子的去除 Ca2+ 草酸 Mg2+ 三聚磷酸钠 Fe3+ 黄血盐 普鲁氏蓝沉淀 2、杂蛋白的去除 ①沉淀法 等电点法：在某一PH下，净电荷为零，溶解度最小 化合沉淀法（如酸性溶液中，蛋白质与三氯乙酸盐、水杨酸盐、过氯酸盐形成沉淀；碱性溶液中，与Ag+、Cu2+、Zn2+形成沉淀） ②变性法 热变性：适于热稳定物质 大幅度调节PH：根据产物特性反向调节 加酒精、丙酮等有机溶剂或表面活性剂等 缺点： 加热法只适合于对热较稳定的目的产物。 极端PH值也会导致某些目的产物失活，且要消耗大量酸碱。 有机溶剂法通常只适用于所处理的液体数量较少的场合。 ③吸附法 加入某些吸附剂或沉淀剂吸附杂蛋白而除去 如：在四环素抗生素中，采用黄血盐和硫酸锌的协同作用生成亚铁氰化锌钾的胶状沉淀来吸附蛋白质。 在枯草杆菌发酵液中，加入氯化钠和磷酸氢二钙钠，两者生产庞大的凝胶，把蛋白质、菌体及其他不溶性粒子吸附并包裹在其中除去。 3、色素及其他物质的去除 脱色方法：离子交换剂、离子交换纤维、活性炭 二、离心过滤与固液分离 菌体分离方法：离心分离、过滤 离心分离：在离心力场的作用下，将悬浮液中的固相与液相加以分离，多用于颗粒较小的悬浮液和乳浊液的分离。 常用的离心方法：差级离心法、密度梯度离心、等密度离心、平衡等密度离心。 过滤：悬浮液通过过滤介质时固态颗粒与溶液分离。分为澄清过滤和滤饼过滤。 1、影响发酵液过滤的因素 菌体细胞体积、各种发酵条件、未利用完的培养基浓度、消泡剂、发酵周期 2、改善发酵液过滤性能的方法 ①调PH值 除蛋白质；减少堵塞和污染 ②凝聚和絮凝 ③吸附剂法 吸附细菌细胞 ④助滤剂法 加速过滤速度 ⑤反应剂法 防止菌丝体黏结，又可作为助滤剂 三、细胞破碎与分离 1、常用的细胞破碎方法 （1）机械法 ①球磨法 ②高压匀浆法 ③超声波法 （2）非机械法 ①酶解法 ②渗透压法 ③反复冻融法 ④干燥法 3、细胞碎片的分离 离心分离法 第三节 微生物药物的分离和精制 一、沉淀法 通过改变条件或加入某种试剂，使发酵产物离开溶液，生成不溶性颗粒而沉降析出的过程。 优点：设备简单、成本低、原料易得、收率高、浓缩倍数高和操作简单 缺点：过滤困难、产品质量较低、需要重新精制 1、等电点沉淀法 利用两性电解质（氨基酸、核苷酸、蛋白质、酶、核酸等）在电中性时溶解度最低的原理进行分离纯化。 优点：操作简便，实际消耗量少，引入的外来物少。