印片及其在术中冰冻病理诊断应用中的体会.ppt

印片及其在术中冰冻病理诊断应用中的体会 首都医科大学附属北京同仁医院刘红刚 电话：010 Email： liuhg1125@163.com 前　言-1 细胞印片，特别是怀疑有肿瘤的淋巴结切面的印片对诊断很有参考价值，因一张好的印片比起冷冻切片和石蜡切片来说可真实反映细胞的形态和结构，并可用于免疫组织化学，因此除了纤维组织较多的组织和肿瘤外，一般细胞丰富的组织和肿瘤，在新鲜标本切开后最好都做印片观察（刘彤华）。 前　言-2 手术过程中，为及时并准确确定病变性质，给临床提供可靠的手术依据，通常采用冰冻切片方法。 自1927年Dudgeon等采用了术中印片细胞学诊断之后，又有许多文献报导证实该方法不仅简单、快速，而且常常可以辅助冰冻切片诊断。 细胞印片诊断准确率均在95.0%以上，假阳性率在0.5%以下，与冰冻切片诊断相近（钱和华、阚秀）。 前　言-3 新鲜标本印片细胞学检查能为冰冻切片提供许多信息。 在乳腺癌、颅内肿瘤、甲状腺、胃肠肿瘤等手术快速病理诊断中，与冷冻切片结合运用，可在一定程度上防止误诊或漏诊，提高冷冻切片诊断的准确性。 有时细胞印片单独应用也是一种较好的快速定性诊断方法。 前　言-4 组织印片诊断不同于一般涂片单纯细胞学诊断，而是细胞学与组织学相互结合观察的结果，有时可进行组织类型的诊断。 在冷冻切片与快速石蜡切片的同时作快速印片，可有效纠正部分误诊（刘自光）。 第一章 印片技术 第一节 印片的制作 一、印片制作的一般步骤 锐刀切开组织 载玻片轻轻触片，垂直适当用力蘸取细胞，避免平行拖拉 95%乙醇固定2min（1-3min） 乙醇（无水→96%→90%，各15s） 苏木素1-2min→流水→ 1%盐酸乙醇液2-3次→水冲 伊红15s→梯度乙醇脱水/低温吹干 二甲苯透明15s 封固 二、常用的固定液及固定时间 95%乙醇乙醚，固定时间30s 甲醛冰醋酸乙醇溶液，固定时间30s 10%福尔马林乙醇（浓度约85%）溶液， 固定时间2-3min 3%冰醋酸乙醇（95%）15s 三、常用的染色方法-1 苏木素-伊红染色： 苏木素染色采用加温或微波处理。 方法是把固定好的玻片经水洗→ 将苏木素液滴加到玻片上覆盖全部细胞→ 置60℃烤箱内1min或微波（低档）处理30s → 自来水洗20s → 0.5%盐酸乙醇分化→ 1%氨水溶液蓝化10s → 0.25%伊红染数秒→ 梯度乙醇脱水→二甲苯透明→中性树胶封片。 全部制片时间在10min以内完成。 瑞氏染色（略） 三、常用的染色方法-2 姬姆萨染色（略） Rapid Stain(Rap) 两步染色法 将未经固定待干未完全干的印片→ 加Rap A液0.8-1ml，覆盖印片后→ 加B液1.5ml混均，覆盖印片→ 静置1-2min→ 自来水清洗、烤干（或电吹风吹干）、封片（3min 出片） 四、制片的注意事项-1 印片时的要点 实性包块印片应选取病变典型、质嫩及脆弱部位印片 病变区较小可适当多作几张印片，以防止细胞过少或出现假阴性结果 囊性包块印片时应先将囊液放掉，选取囊壁较厚、病变典型或有乳头的位置，如标本有囊液或出血，可先用干纱布将液体擦干，然后再作剖面印片 尽可能避开出血、坏死及脂肪组织较多区域，并防止水分等混入标本 操作要轻巧，用力要适当，避免挤压以防损伤细胞 印片要均匀，厚薄适度，太厚细胞堆叠，太薄细胞过少，均影响诊断 尽可能多印几个切面，以防因病灶太小而遗漏 四、制片的注意事项-2 及时正确地固定 固定的目的是保持细胞自然形态、防止细胞自溶。 四、制片的注意事项-3 印片后处理 印片切勿高温烘烤、干燥过度，以防细胞变形、核染结构不清，造成人为细胞退变，影响诊断。 印片放置时间不能过长。印片放置5h以内可见细胞轮廓，细胞不同程度退变，印片放置10h以后细胞结构不清，细胞破坏，核肿大、溶解。 固定液的选择很重要，经反复试验比较证明95%乙醇乙醚或甲醛冰醋酸具有较好的固定效果，乙醇乙醚固定液渗透性较强，固定效果较好；甲醛冰醋酸可以增强固定效果，对抗乙醇固定的收缩作用，增强染色效果。 印片固定时间不可过长或过短，时间过长容易导致细胞核过度收缩，核染色变深，核内染色质浓缩不清楚；时间太短容易使细胞肿胀变大，影响诊断。 四、制片的注意事项-4 提高染色质量 印片染色质量的好坏在很大程度上直接影响细胞学诊断的准确性。术中快速病理诊断需要在很短的时间内对组织病变做出诊断，在节约时间的同时不能忽略了