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PAGE 12 - 中華醫事科技大學生物科技研究所 Institute of Biological Science and 碩士論文 在人類上皮癌細胞A431細胞中PHGPx對細 胞移行的影響 Effect of phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase (PHGPx) on cell migration in human epidermoid carcinoma A431 cells 研 究 生﹕傅怡翔 (Yi - Shiang Fu) 指導教授:?陳清俊 博士 (Ching-Jiunn Chen, Ph. D.) 中華民國 一百 年 一 月 January,2011 致 謝 首先要先感謝我的指導教授陳清俊老師，我從沒當過專題生，一開始進來什麼技術都不會，都是老師慢慢教我的。也要感謝成功大學黃暉升老師以及華醫科大的陳璟賢老師給予本論文最佳的建議以及修正，使論文能更加完善。 想當初進實驗室學姊剛好要畢業，什麼都不會的我，有時候都不知道該怎辦，實驗經驗真的很重要，我覺得實驗並沒有簡單困難之分，只有經驗跟沒經驗之分，沒經驗的我一開始做最基本實驗，所花之時間也是別人兩三倍，但是結果又並不如意，不會還是會給自己打氣，再做一次就好，在此還要謝謝盧宇秋學弟在實驗室大大小小的整理以及給一些我沒有的經驗。 感謝家人在這兩年多全心的給我支持，也要感謝各位同學以及學弟妹的幫忙。以前跟同學吃飯打球所有話題永遠離不開實驗主軸，有時候還會聊到要不要一起休學了，當然是開玩笑的，有這些朋友讓自己抒發心情，又覺得困難沒什麼大不了了。 要感謝的人實在太多了，而在書寫論文時候指導教授指正，實在很感謝老師。謝謝各位這兩年的照顧。 中文摘要 磷脂氫穀胱甘肽氧化酶(PHGPx)本身具有極強的抗氧化作用，目前已知它不僅可保護細胞膜免遭受過氧化的損傷，而且還可能參與細胞訊息傳遞的調控。基質金屬蛋白酵素 9（Matrix metalloproteinase 9: MMP 9）屬於MMPs的家族成員之一，它與腫瘤的轉移特別有關。研究指出幾乎所有的癌細胞皆會有細胞移行的作用。 之前實驗室的研究發現，在多種癌細胞中，PHGPx的mRNA表現皆有較高的趨勢。至於本篇論文，主要在探討癌細胞中大量表現之PHGPx是否與癌細胞的轉移有關，而其機制又是如何？本篇所使用的細胞株有三：分別為vector control穩定型細胞株(TR 15)，inducible PHGPx-overexpression穩定型細胞株(IA 38)，以及inducible PHGPx-knockdown穩定型細胞株(IPI 7)。 經由傷口癒合的實驗發現：當細胞大量表現PHGPx之後的癒合能力明顯比PHGPx 被降低之細胞要來得快。另外，由Western blot的結果顯示，PHGPx 大量表現的細胞其MMP 9的表現量相對比PHGPx knockdown之細胞要來的高，此意味著細胞中的PHGPx大量表現時，所促使細胞移行加速的機制是需要透過MMP 9的表現方能達成。至於MMP 2，由於Western blot的結果顯示其變化量不大，所以可以排除其與PHGPx造成細胞移行加速之關係。 在探討作用機制方面，當細胞額外添加H2O2時，雖然會導致大量表現PHGPx的細胞，其細胞移行的能力會下降，但相較之下，PHGPx knockdown的細胞則下降的更加明顯，由此說明，PHGPx能促進細胞移行的作用是與其具抗氧化能力有關。另外，經由transmigration assay的實驗發現，以diethyl maleate (DEM)去抑制PHGPx酵素反應所需之麩氨基硫後，可觀察到PHGPx大量表現的細胞，其transmigration的能力會比control細胞來的好。而PHGPx knockdown的細胞，則其transmigration的能力會比control細胞更差，由此說明，細胞中的PHGPx在喪失抗氧化活性之下，也是能促進細胞的transmigration能力。由於細胞移行時必須要有結構蛋白的參與方能達成，所以此結果是否暗示了PHGPx可能也屬於細胞內的結構蛋白，因此當其大量表現時即會對細胞移行有正向的幫助。 綜合以上的結果，我們的結論是細胞中的PHGPx具有促進細胞移行之作用，此作用的達成除了與MMP 9的表現有直接相關外，PHGPx本身具抗氧化能力與可能是結構蛋白的細胞功能也是促成的因素之一。 Abstract Phospholipid hydroperoxide glutathione peroxide (PHGPx) owning powerful antioxidative a