动植物细胞培养产酶.ppt

比较植物细胞培养产酶和微生物细胞产酶的异同点； 2. 举例说明动物细胞培养产酶的实例； 思考题 * 3.3 植物细胞培养的工艺条件控制 温度的控制：室温25（20～35℃）； pH值的控制：5.0-6.0； 溶解氧的控制：对氧一般要求，但要求低剪切力； 光照控制：一般要求光照，如欧芹细胞只有在光照下才能形成类黄酮化合物；蓝光可以显著促进玫瑰茄细胞培养生产花青素； 3.3 植物细胞培养的工艺条件控制 前体的添加：添加前体能提高次级代谢物的产量，如苯丙氨酸的添加能促进辣椒细胞生产辣椒胺的产率； 刺激剂的应用：常用刺激剂有微生物细胞碎片和果胶酶、纤维素酶等微生物胞外酶；如Rolfs等用霉菌细胞壁碎片促进花生细胞中L－苯丙氨酸裂合酶的含量增加4倍，同时使二苯乙烯合酶的量提高20倍；Funk等人采用酵母葡聚糖（酵母细胞壁的主要成分）作为刺激剂，可使细胞积累小孽碱的量4倍； 3.4 典型的植物细胞培养产酶工艺过程 —大蒜细胞培养产SOD 研究背景 SOD的作用： 抗氧化、抗衰老、抗辐射，药用酶； 传统SOD制备方法: 动物血液提取：杂蛋白多，难以达到药用要求； 植物中提取：受生长环境及生长周期影响； 植物细胞培养优势： 周期短，培养15天达到自然生长大蒜中含量，可控性好； 3.4 典型的植物细胞培养产酶工艺过程 —大蒜细胞培养产SOD 1）大蒜愈伤组织的诱导 选取结实、饱满、无病虫害的大蒜蒜瓣，在4℃冰箱中放置3周，以打破休眠。去除外皮，先用70％乙醇消毒20s，再用70％乙醇消毒20s，再用0.1%的氯化汞消毒10min，然后用无菌水漂洗3次； 在无菌条件下，切成0.5cm3左右的小块，植入含有3mg/L2,4-D和1.2mg/L 6-BA的半固体MS培养基中，25℃、600lux，12h/d的光照条件下培养18天，诱导得到愈伤组织，每18天继代一次 ； 2）大蒜细胞的悬浮培养 将上述在半固体MS培养基上培养18天的愈伤组织，在无菌条件下转入含有3 mg/L和 2,4-D和1.2mg/L 6-BA的液体培养基中，加入灭菌的玻璃珠，25℃、600lux，12h/d的光照条件下培养10－12天，使愈伤组织分散成为小细胞团或单细胞。 在无菌条件下，经过筛网将小细胞团或单细胞转入含有3 mg/L和 2,4-D和1.2mg/L 6-BA的液体培养基中，25℃、600lux，12h/d的光照条件条件下培养18天； 3）SOD的分离纯化 细胞培养完成后，收集细胞，经过细胞破碎，用pH7.8的磷酸缓冲液提取、有机溶剂沉淀等，分离得到SOD 二、动物细胞培养产酶 动物细胞的特性 动物细胞培养特点与培养方式 动物细胞培养的工艺条件控制 动物细胞培养产酶的工艺过程 典型动物细胞培养产酶的工艺过程 2.1 动物细胞的特性 动物细胞的形态 A、贴壁依赖型 1、成纤维细胞（fibroblast 或mechanocyte type) 2、上皮细胞（epithilium cell) 3、游走细胞（wondering cell） 4、多形性细胞（polymorphic cell) B、悬浮型或非贴壁依赖型 1、动物细胞的特性 动物细胞的特性 动物细胞没有细胞壁，适应环境能力差； 动物细胞的体积大，稍小于植物细胞； 大部分细胞具有群体效应、锚地依赖性、接触抑制性； 动物细胞的营养要求较为复杂； 2.2 动物细胞培养特点与培养方式 动物细胞生长缓慢，细胞倍增时间15～100小时； 为防止微生物污染，培养过程中需要添加抗生素； 动物细胞由于无细胞壁，对剪切力敏感，必须严格控制培养控制条件； 大多数动物细胞具有锚地依赖性，适宜采用贴壁培养；部分细胞（如来自血液、淋巴组织的细胞、肿瘤和杂交瘤细胞，可采用悬浮培养； 动物细胞培养基成分较复杂、产品分离纯化过程繁杂，成本较高； 原代细胞培养50代后会退化死亡，需要重新分离； 2.3 动物细胞培养的工艺条件控制 动物细胞培养方式：悬浮培养、固定化细胞培养和贴壁培养； 1） 悬浮培养：对于非锚地倚赖性细胞，如杂交瘤细胞、肿瘤细胞以及来自血液、淋巴组织的细胞，采用悬浮培养； 气升式反应器 笼式通气搅拌罐 中空纤维管 陶质矩形通道蜂窝状生物反应器 2）贴壁培养：对于锚地依赖性的细胞，如成纤维细胞、上皮细胞等，在培养过程中要贴附于固体表面生长，常用的动物细胞体系，如Hela,Vero,BHK,CHO等； 滚瓶培养：结构简单、技术成熟、重现性好；但劳动强度大、细胞生长表面积小、体积产率低； 滚瓶培养系统 3） 固定化细胞培养：锚地依赖性和非锚地依赖性都可以采用固定化细胞培养， 固定化方法：吸附法、包埋法和微