丙戊酸诱发大鼠自闭症分子机制研究.DOC

丙戊酸诱发大鼠自闭症神经毒理机制研究 洪玲娟 田允 王欢 蒋权 王成坤 廖美华 楼宜嘉 韩峰* 浙江大学 药理毒理与生化药学研究所， 杭州 310058 *通讯作者， HYPERLINK mailto:changhuahan@zju.edu.cn changhuahan@zju.edu.cn 目的：产前服用抗癫痫药物丙戊酸钠（valproic acid）增加儿童自闭症风险。本研究探讨丙戊酸诱发大鼠自闭症的分子毒理机制。 方法：大鼠怀孕12.5天时，实验组按600 mg/kg给予腹腔注射丙戊酸0.25 mL/100 g（240 mg/mL溶于生理盐水），对照组腹腔注射生理盐水（0.25 mL/100 g）。注射的孕鼠产下的幼鼠即为自闭症模型组。出生后当日，记为生后第1天（postnatal day 1，PND1）。Western blot法检测PSD50大鼠海马中钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（calcium/calmodulin-dependent protein kinase， CaMKII）和CaMKII突触前底物（SynapsinI）与突触后底物（GluR1）磷酸化水平变化，同时还检测了细胞膜表面褪黑激素受体1（melatonin receptor1，MTR1）蛋白量的变化。小鼠脑神经瘤细胞Neuro-2α用0.5mM丙戊酸处理24 h后检测细胞膜表面MTR1内吞变化，并用酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）定量检测了MTR1在丙戊酸处理组和正常对照组中内吞的变化。 结果：丙戊酸诱导的自闭症大鼠模型脑海马中磷酸化CaMKII（Thr286）水平显著下降，并且CaMKII突触前底物SynapsinI（Ser603）与突触后底物GluR1（Ser831）磷酸化水平也有相应变化。提示CaMKII/SynapsinI/GluR1磷酸化水平可能与自闭症的病理过程相关。此外，我们发现MTR1在脑内神经元细胞膜上表达量增加。与此一致，在Neuro-2α细胞实验中发现丙戊酸处理24 h后可逆转由melatonin（100nM）诱导的神经元MTR1内吞，表现为膜上MTR1表达量增加，内吞受体减少。提示丙戊酸可能通过干预melatonin/ MTR1介导的神经元信号转导，最终诱发了一系列自闭症关联的神经生物化学及功能改变。 结论：丙戊酸可以干预melatonin/ MTR1介导的神经元信号转导，可能与自闭症病理过程中CaMKII/SynapsinI/GluR1磷酸化水平稳态失衡相关联。 关键词：丙戊酸；自闭症；CaMKII；褪黑激素受体1；内吞