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第十三章 免疫细胞分离与免疫细胞功能检测及应用 河南科技大学第一附属医院检验科 许德英 第十三章 免疫细胞的分离与免疫细胞功能检测及应用 第一节??????????? 免疫细胞的分离 一、??????? 外周血单个核细胞分离 二、??????? 淋巴细胞的分离 三、??????? T细胞和B细胞的分离 四、??????? T细胞亚群的分离 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 一、? Ｔ细胞表面标志及亚群 二、 B细胞表面标志 三、? NK细胞表面标志 第三节 抗原提成细胞表面标志的检测 一、??单核-吞噬细胞系统 二、? 树突状细胞 第四节 淋巴细胞的功能检测 一、T细胞功能检测 二、B细胞功能检测 三、NK细胞活性测定 第五节 其他免疫细胞功能检测技术 一、中性粒细胞功能检测 二、巨噬细胞功能检测 第六节 免疫细胞表面标志和功能检测的临床应用 第一节 免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T细胞和B细胞的分离 T细胞亚群的分离 一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞（peripheral mononuclear cells, PMNC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 Ficoll分离液法主要用于分离外周血中的单个核细胞，是一种单次差速密度梯度离心的分离法。 细胞分离基本原理 不同细胞密度不同 不同细胞表面生物学特性不同 不同细胞表面分化抗原不同 不同细胞密度不同 密度梯度离心法（density gradient centrifudation) 二 、淋巴细胞分离 贴壁粘附法 吸附柱过滤法 磁铁吸引法 Percoll 分离液法 （连续密度梯度离心） Percoll (商品名） 经过聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrolidone,PVP)处理的硅胶颗粒大小不一的混悬液。 高速离心后，形成连续密度梯度，可将密度不同的细胞分离纯化。分离淋巴细胞纯度达98% ，单个核细胞纯度达78% 。流程长、烦琐、费用高。 三、T细胞和B细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 E花环分离法 尼龙棉柱分离法 方法评价： 实验室常用分离方法之一 简便、易行 获得细胞纯度较高 T细胞90％ B细胞80％ 尼龙毛柱法＋E花环法，T细胞可达99％以上 四、T细胞亚群的分离 亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法 亲和板分离法 利用亲和层析法分离淋巴细胞亚群，其原理是各种淋巴细胞亚群具有不同的抗原性，将相应抗体结合于塑料平板上，继加细胞悬液，凡抗原阳性的细胞则与相应抗体结合，抗原阴性的细胞可从未吸附的细胞悬液中获取。同样若用特异性抗原交联在塑料板上，则可分离得具有特异抗原受体的淋巴细胞。淋巴细胞受体与特异抗原或抗体接触，可引起细胞激活，因此，凡欲去除细胞悬液内某一细胞亚群时，本法更适用。如要分离CD4+或CD8+细胞，则可用抗CD4或CD8单克隆抗体吸附。用抗Ig抗体则可分离B细胞。同样，用活化的C3包被，可分离出有C3受体的细胞。 （五）免疫磁珠法 原理： 将抗体交联于磁珠表面形成免疫磁珠 （Immunomagnetic bead，IMB） 细胞分选 细胞分选（cell sorting）：有选择地从一个混合细胞群体中分离出某一类特定细胞的技术。 第二节 淋巴细胞标志及亚群分类 常用于鉴定和检测淋巴细胞表面标志是簇分化抗原（Cluster of differentiation，CD）。 细胞表面分化抗原（CD抗原） 一、T细胞表面标志及其亚群 CD3+CD4+CD8-辅助性T细胞 （help T cell,Th） CD3+CD4-CD8+细胞毒性T细胞 （cytotoxic T cell,Tc or CTL） CD4+CD25+调节性T细胞 （regulatory T cell,Tr or Treg） 二、B细胞表面标志 SmIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体，部分CD分子是B细胞的重要表面标志，其中以SmIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标。 CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19和CD5双阳性，而B2细胞仅为CD19阳性，B2细胞为通常所指的B细胞。 三、NK细胞表面标志 人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。 第三节 抗原提成细胞表面标志的检测 抗原提呈类细胞表面标志 APC的概念 抗原递呈细胞（anti