通识基础-大蒜细胞SOD酶的提取分-10页.pptxVIP

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2019-03-26 发布于贵州
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通识基础-大蒜细胞SOD酶的提取分-10页.pptx

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实验六; 在生命科学高度发展的今天，蛋白质、酶和核酸等生物大分子的结构与功能的研究是探求生命奥秘的中心课题，而生物大分子结构与功能的研究，必须首先解决生物大分子的制备问题，有能够达到足够纯度的生物大分子的制备工作为前题，结构与功能的研究就无从谈起。然而生物大分子的分离纯化与制备是一件十分细致而困难的工作。 ; 与化学产品的分离制备相比较，生物大分子的制备有以下主要特点： ⑴生物材料的组成极其复杂，常常包含有数百种乃至几千种化合物。 ⑵许多生物大分子在生物材料中的含量极微，分离纯化的步骤繁多，流程长。 ⑶许多生物大分子一旦离开了生物体内的环境时就极易失活，因此分离过程中如何防止其失活，就是生物大分子提取制备最困难之处。 ⑷生物大分子的制备几乎都是在溶液中进行的，温度、pH值、离子强度等各种参数对溶液中各种组成的综合影响，很难准确估计和判断。(影响因素多 ) ; ;大蒜SOD的提取及活性测定;试验试剂：大蒜磷酸缓冲液（PH7.8, 0.05mol/l)(PH8.3) 氯仿—乙醇混合液冷丙酮邻苯三酚浓盐酸操作步骤： 1、SOD提取：称取5g大蒜蒜瓣,加入石英砂研磨破碎细胞，加入15ml的PH7.8 0.05mol/L的磷酸缓冲液，研磨搅拌20分钟，使SOD充分溶解，6000rpm离心，弃去沉淀，得上清液。(留出1ml备用,准确量取剩余上清液体积,记录);大蒜SOD的提取及活性测定;4、粗酶液活性测定（邻苯三酚法）提取液、粗酶液、酶液中SOD活力检测，具体步骤如下。;5、溶液中可溶性蛋白含量测定：分别从1ml 备用的提取液、粗酶液、酶液各取0.3ml按以下倍数稀释,260nm/280nm测定吸光值,按公式计算蛋白质浓度. 提取液稀释:50 × 粗酶液稀释:20 × 酶液稀释:10 × 蛋白质浓度(mg/ml)=(1.45A280 – 0.74A260) ×稀释倍数;6、计算：酶活力单位U/ml=2（OD1-OD2）×5/0.1 (1ml反应液中,每分钟抑制邻苯三酚自氧化速率达到80%时的酶量) 总活力U=活力单位×总体积比活力U/mg=活力单位/蛋白质浓度纯化倍数=粗酶液(酶液)比活力/提取液比活力回收率=粗酶液(酶液)总活力/提取??总活力 7,试验结果讨论.