上海生科院实验生物学 酶工程内容资料.ppt

酶工程;;“工程”的定义(Webster);教学目标;课程基础;参考资料;内容安排 (约45分钟休息10分钟);酶学知识复习;酶是什么？;The Mechanism of Enzyme Catalysis;酶学相关定义;How An Enzymes EC Number Is Assigned;酶的命名 EC编号规则;酶的命名氧、转、水、裂、异、合(连);酶知识复习小结;基础篇;酶工程的历史;酶的生产;植物来源;动物来源的工业用酶;微生物来源的工业用酶;微生物酶生产率提高的手段;分子生物学知识复习;分子生物学知识复习;重组蛋白质的表达;克隆酶基因;Model PCR products showing combinations of protein expression motifs relative to the cloning sites used to insert the gene into an expression vector.;Typical combinations of protein expression elements in expression vectors.; 重组表达系统 E. coli (T7, tac/trc, T5, ara …) Bacillus Pichia pastoris (aox1, gap) Aspergillus niger …… Baculovirus CHO 体外翻译系统;首选重组蛋白质表达系统－－大肠杆菌;Factors influencing recombinant protein production in E.coli; E.coli表达系统可用启动子列表;常用大肠杆菌表达系统;首选中的首选-- pET系统;T7表达系统工作原理;pET表达流程;pET Vector Characteristics Table;以pET24开始; 利用增溶标签 进行蛋白质重组表达和纯化;MBP作为增溶标签的优越性;大肠杆菌表达实验策略;重组表达制备有功能的蛋白质;大肠杆菌表达系统小结;酵母表达系统 (Invitrogen);Pichia Expression Kits;Pichia pastoris 简介;Pichia pastoris表达体系的优点;Typical Pichia pastoris expression vector ;Promotor;Pichia pastoris strains ;Pichia pastoris表达实验流程;Pichia pastoris表达系统小结;重组酶表达小结;酶制备流程图;细胞破碎手段;细胞破碎需考虑因素;Manton-Gaulin匀浆机;从澄清液中提取酶;胞内酶纯化?去除核酸;色谱 （层析）;酶制剂;小结;固定化酶优点;a. 吸附b. 共价连接c. 包埋d. 膜限制;多点作用使酶稳定化;固定化酶方法比较;固定化载体;新型固定化方法—无载体固定化;固定化酶小结;酶反应器图解;基础篇小结;提高篇;获得新酶的途径;酶的设计方法;基于功能--生物多样性与新酶的发现;;;天然酶;改造目的;酶的改造;Timeline | 20 years of protein engineering;分子生物学知识复习;蛋白质??列空间;PAM250氨基酸相对突变率矩阵和基本氨基酸性质关系venn图 ;有理设计;经典途径;Copyright restrictions may apply.;序列与结构分析;多重联配ClustalW;Crystals: 18% PEG6K, 0.1 M Bicine, pH 8.5, 0.01 M CdCl2.;;;;PyMOL:;MVD 蛋白质与配体分子对接分析;有理设计目标;提高热稳定性的重要全局性因素;;氨基酸残基分布差异;对于热稳定性改造的具体指导;pH曲线的改变;融合蛋白质－－广义的有理设计;PCR原理;定向突变 - PCR;Stratagene Mutagenesis Kit Selection Guide;两种定点突变方法的比较;有理设计小结;生物催化剂的定向进化 ;高频随机突变导入方法;Random Mutagenesis kit ;高频随机突变导入方法;逐点饱和突变技术;逐点饱和突变技术;定向进化提高枯草芽孢杆菌蛋白酶E在DMF水溶液的活力;进化 逐步过程 自然进化 自发突变 重组 自然选择;人类的作物，花卉和家禽家畜 育种实践有几千年历史;革命 极快改变 实验室进化 加快突变速度 分子育种 筛选;;DNA shuffling;DNA