临床医学研究生课件-生物化学-核酸的分离与纯化.pptVIP

* * （2）oligo(dT)-纤维素液相结合离心法 原理与oligo(dT)-纤维素柱层析法完全相同，只是不经填柱，而是直接将oligo(dT)-纤维素加入到一系列含不同RNA样品的微量离心管中，通过离心收集吸附有poly(A)+RNA的oligo(dT)-纤维素，经漂洗后，用含70%的乙醇洗脱液将吸附的poly(A)+RNA从oligo(dT)-纤维素上洗脱并沉淀出来。 * * 该法可同时批量处理多个样品，而且能从少量的RNA样品中分离出poly(A)+RNA。用本法分离poly(A)+RNA时，应选用等级较高的oligo(dT)-纤维素，如oligo(dT)18-30纤维素，而一般的柱层析填充的是oligo(dT)12-18纤维素。 * * （3）磁珠分离法 是利用oligo(dT)与poly(A)互补配对的特性，用生物素标记oligo(dT)，通过它与mRNA3末端poly(A)的退火形成杂交体，然后用标有亲和素的顺磁球珠和磁性分离架捕获并洗涤生物素oligo(dT)/mRNA杂交体，最后用无RNase的去离子水将之洗脱下来，达到从总RNA中分离mRNA的目的。 * * 5′m7G AAAAAAAAAAAA3 ′ 3′TTTTTTTTTTTT-Biotin5′ + 总RNA中的poly(A) +RNA分子 退火形成杂交体 5′m7G