基于RAPD和ITS分子标记对血红铆钉菇菌株的鉴别探究.pdfVIP

食用菌学报@2013．20(3)：10～14 文章编号：1005—9873(2013)03—0010—05 基于RAPD和ITS分子标记对血红铆钉菇菌株的鉴别研究 王守现h2，刘 宇1’2，张英春1，许峰1，赵 爽1，王兰青1，耿小丽1，孟莉莉1 [1北京市农林科学院植保环保研究所，北京市食用菌工程技术研究中心，北京100097； 2农业部都市农业(北方)重点实验室，北京10097] 摘 要：以收集的3个血红铆钉菇(Chroogomphusrutilus)菌株和采集的4个血红铆钉菇子实体作为研究对象， 运用RAPD和ITS序列测定两种技术鉴定其是否为血红铆钉菇。RAPD分析结果表明四个子实体样本间差异 较小，亲缘关系较近；三个菌株之间的差异大，亲缘关系较远。ITS测序结果与GenBank中同源序列比对结果表 明4个子实体样品与已登录的血红铆钉菇菌株的相似度都大于99％，表明这4个样品是血红铆钉菇；而3个菌 株与子实体样本间的同源性较小，分别与其它种类的ITS序列相似，表明这3个菌株不是血红铆钉菇。 关键词：血红铆钉菇；RAPD；ITS；鉴别 rutilus)隶属于来，RAPD(random 血红铆钉菇(Chroogomphus amplifiedpolymorphic DNA)技术已被用于多种真菌的品种鉴定口]。 担子菌门(Basidiomycota)，伞菌纲 transcribed ITS(internal 在真菌鉴定中，rDNA (Agaricomycetes)，牛肝菌目(Boletales)、铆钉菇 科(Gomphidiaceae)，俗称红蘑、松树伞、松树钉spacer)区的DNA序列在真菌物种间存在一 等，子实体暗赤褐色，钟形至圆锥形，是针叶树木 定的变异，也常用于属内种间或种内群体的鉴 重要的外生菌根菌，夏、秋季群生或散生于松林 定分析，是目前国内外真菌鉴定和分类的重要 地上，可与油松、樟子松赤松等形成外生菌根，分 分子依据之一[8_12]。笔者用RAPD指纹图谱 布于中国(辽、吉、黑、冀、滇)、日本、欧洲及北 分析和ITS区域碱基序列分析两种方法，对收 美[1’2]。血红铆钉菇菌肉肥厚，肉质细嫩，口感清 集的3个血红铆钉菇菌株及采集的4个子实 爽，风味独特，深受人们青睐，是华北、东北地区 体样品进行了分析，希望在开展血红铆钉菇深 重要的野生食用菌之一；其菌丝体分离培养较为 入研究之前确定菌株真实可靠，现将结果报告 困难，子实体尚不能人工栽培[3与]，市场货源为人 如下。 工采挖的野生子实体，鲜品和干品都价格不菲， 1材料与方法 市场前景很好，但现在销售的一些血红铆钉菇菌 种和产品存在一定程度的混乱。 1．1材料 近年来，分子标记已愈来愈多的应用于真 1．1．1供试样品 菌分类和系统发育研究[6]，20世纪90年代以 见表1，子实体均为笔者在野外采集。 表1供试样品 Table1 Putative rutilus Chroogomphussamples 收稿日期：2013—02—10原稿；2013—05—05修改稿 基金项目：现代农业产业技术体系北京市食用菌产业创新团队项目、北京市科技新星项目(编号：2009A29)、北京市 农林科学院青年基金项目(编号：QN201109)的部分研究内容