课件：从基因多态性到脂肪酸代谢.ppt

Met (uM) PA (0.1 mM) + - - - + + + 100 250 500 0 50 100 150 200 250 FABP4 mRNA (% of Control) ** ** *** * 300 RT-PCR结果显示二甲双胍在转录水平调节脂肪酸结合蛋白4的表达 二甲双胍对脂肪酸结合蛋白4的调节作用 基因转录水平 目前研究表明参与脂肪酸代谢调控的转录因子非常多，叉头状转录因子O1（forkhead transcription factor O1,FoxO1）作为Fox蛋白家族中的一员，常表达于肝脏，脂肪，骨骼肌等糖脂代谢活跃的器官。 FoxO1可参与多种脂代谢相关酶的调节，如脂蛋白脂肪酶（LPL）等，可能是肥胖与糖尿病发病的联系纽带。 野生型 负显性型 - 持续激活型 Foxo1 质粒DNA FABP4 β-actin A FABP4 β-actin Foxo1 siRNA(100nM) 棕榈酸 (0.1 mM) - + - + - - + + B 转录因子FOXO1是否参与二甲双胍对脂肪酸结合蛋白4表达的调节？ DNA转染基因过表达 siRNA基因沉默 FOXO1对脂肪酸结合蛋白4的调节作用 我们采用FOXO1质粒DNA过表达FABP4基因，发现野生型和持续激活型显著增加FABP4的表达，而负显性型显著降低其表达 采用siRNA沉默FOXO1，发现FOXO1siRNA可降低FABP4的表达，同时逆转棕榈酸所致的FABP4表达的升高 提示：转录因子FOXO1参与了二甲双胍对脂肪酸结合蛋白4表达调节 棕榈酸 (0.1 mM) - - 二甲双胍 (250uM) DAPI核染色 FOXO1染色 合并 + - - + + + 二甲双胍通过促进转录因子FOXO1核外排，降低其转录活性，而抑制脂肪酸结合蛋白4的转录 二甲双胍对FOXO1转录活性的影响 基础状态 高游离脂肪酸状态 Foxo REB 脂肪酸结合蛋白4 Foxo1 脂肪酸结合蛋白4 细胞内脂质沉积 二甲双胍 二甲双胍抑制细胞内脂质沉积信号通路图 二甲双胍可通过促进FOXO1核外排，抑制其转录活性进而抑制游离脂肪酸结合蛋白4的表达，减少游离脂肪酸摄取，进而减少细胞内脂质沉积。 游离脂肪酸代谢通路及脂质沉积干预研究  棕榈酸及 AMPK激动剂干预 构建巨噬细胞 脂质沉积模型 观察AMPK-CPT1通路 对细胞内脂质沉积的影响 细胞水平 脂肪酸β氧化调控关键位点：肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT-1) CPT-1在细胞内脂质沉积中的作用如何？ 脂肪酸氧化与细胞内脂质沉积 0uM 25uM 50uM 100uM 200uM 棕榈酸(uM) Palmitic acid (PA) 0 25 50 100 200 C16H32O2 β-actin CPT-1 棕榈酸显著增加细胞内脂质沉积 结果:棕榈酸抑制肉毒碱棕榈酰转移酶（CPT-1）的表达 提示:棕榈酸可能通过抑制脂肪酸氧化增加细胞内脂质沉积 棕榈酸 脂肪酸β氧化限速酶CPT-1的表达如何变化 ？ 蛋白水平 如何逆转？ 腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与细胞内脂质沉积 AMPK-细胞内“代谢感受器” 参与细胞代谢多过程 脂肪酸氧化 葡萄糖转运 甘油三脂合成 脂 解 神经酰胺合成 氧化应激 线粒体 功能失调 NF-KB激活 线粒体 氧化酶 已证实AMPK可通过促进下游乙酰辅酶A羧化酶（ACC）失活增加CPT-1表达 脂肪酸氧化 脂质沉积 肥胖 AMPK能否通过增加CPT1表达，促进脂肪酸氧化，减少细胞内脂质沉积 ？ 乙酰辅酶A羧化酶 乙酰辅酶A 丙二酰辅酶A + + - + 棕榈酸(0.1 mM) - - AMPK siRNA(100nM) - + 细胞水平 采用siRNA干扰技术沉默AMPK基因， 结果发现无论在基础状态还是高游离脂肪酸下， AMPK基因沉默能增加细胞内脂肪沉积。 提示：AMPK可逆转高游离脂肪酸所致细胞内脂质沉积 基础状态 高游离脂肪酸状态 腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)与细胞内脂质沉积 CPT-1过表达对脂肪酸氧化及细胞内脂质沉积的影响？ 何种转录因子参与其中的调节？ 体内动物实验？ CPT-1在白色脂肪组织棕色化中的作用？ 可以推测： CPT-1--肥胖防治的新靶点 研究仍在继续… 瘦素抵抗参与肥胖,2型糖尿病高血压、冠心病、脑梗塞及肾病等多种并发症的发生和发展，与胰岛素抵抗相互关联 总 结 β3-AR基因多态性存在种族差异，分布不同且与肥胖尤其腹型肥胖及胰岛素抵抗相关 脂肪酸代谢相关酶在内脏脂肪细胞及巨噬细胞脂质沉积中发挥一定作用，二甲双