食品科学毒理学实验教案(2012).docVIP

实验一 实验动物的一般操作技术 实验目的 学习食品毒理学试验中有关动物试验的基本操作技术，掌握实验动物的选择，性别鉴定，抓取方法，标记方法，染毒方法，生物材料采集和实验动物处死等技术。 二、器材与试剂 苦味酸酒精饱和溶液、美蓝溶液、0.9％的NaCl溶液 托盘天平、电子天平、棉签、1mL注射器、灌胃器、烧杯、容量瓶、定量取血管、玻璃毛细管、鼠笼 昆明种小鼠 三、操作方法 实验动物的选择 食品毒理学研究中，无论应用何种种属、品系的实验动物，都必须是健康动物。动物的选择，应重点检查下述项目。 外观 体形丰满，被毛浓密光顺，行动敏捷，反应灵活。 眼睛 明亮，瞳孔清晰，双侧等圆，眼内无分泌物，眼睑无肿胀、发红。 耳 耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮、糜烂。 鼻 无喷嚏，无浆性黏液分泌物。 皮肤 无创伤、脓疮、疥癣、湿疹。 头颈部 姿势端正。颈项歪斜提示可能存在内耳疾患，不能用于实验。 消化道 无呕吐、便秘、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 神经系统 无震颤、麻痹、运动失调，如有转圈运动或倒提时呈圆圈摆动，不能用于实验。 四肢及尾 四肢、趾及尾无红肿、溃疡。 食欲及营养 良好 实验动物的性别鉴定 大鼠、小鼠 主要观察肛门与生殖孔的间距，雄性间距大，而雌性间距小；雄鼠夏天或卧位可见睾丸，雌鼠腹部有明显乳头，大鼠6对，小鼠5对。 实验动物的抓取和固定 实验前应了解动物的一般习性，正确抓取和固定动物，既要大胆，又要细心。 1. 小鼠的抓取方法 先用右手抓取鼠尾部提起，置于实验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓取小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手手心中，以无名指按住鼠尾根部，小指按住后腿即可。右手则可进行灌胃或注射等操作。 实验动物的称重、编号和标记 称重 一般同一组内，同性别动物体重差异应小于平均体重的10％，组间同性别动物体重平均值相差应小于5％。 编号和标记 染色法 一般采用不同颜色的染料涂擦于动物不同部位的被毛染色，表示不同号码，此法适用于大鼠、小鼠和豚鼠。常用的染料有苦味酸酒精饱和液（黄色）、美蓝溶液（蓝色）或甲基紫酒精饱和液、0.5％中性红或品红溶液（红色）等。具体方法为：头部为1号，按顺时针方向，右前肢2号、右肋3号、右后肢4号、尾跟5号、左后肢6号、左肋7号、左前肢8号、背部9号；在相应部位涂染另一种颜色染料表示十位，两种颜色可编1~99号。 实验动物的染毒途径和方法 经口染毒 灌胃 将毒物不经口腔和食道，直接灌入胃内。急性毒性试验多用此法。 具体方法：用带有灌胃器的适当容积注射器吸取所需的受试液（溶液、混悬液、乳液）备用。①小鼠保定，一手紧抓住耳后、颈部皮肤，用无名指、小指和大鱼际肌压紧尾根部。将动物固定成垂直体位，腹部面向操作者，使上消化道固定呈一直线。另一手持注射器，将针头由动物口腔侧插入，避开牙齿，沿咽后壁缓缓滑入食道。若遇阻力，可轻轻上下滑动探索，当感到阻力消失时，即将针头深入至胃部。如动物挣扎，应停止进针或将针头拔出，千万不能强行插入，以免损伤、穿破食道，甚至误入气管，导致动物立即死亡。 进针深度一般是小鼠2.5～４cm。为验明灌胃针是否正确地插入胃部，可轻轻回抽注射器，如无气泡抽出表明已在胃中，可将受试液推入。 喂饲 将受试化学物均匀拌入饲料或溶于饮水中，由动物自由采食。适用于染毒时间较长的毒性试验，如亚慢性和慢性毒性试验。 吞咽胶囊 将所需剂量的受试化学物装入胶囊内，强制动物咽下。适用于易挥发、易水解和有异味的化学物，兔、犬、猫可用此法。 2．注射染毒 外源化学物的毒性研究中，根据试验目的和需要，可选择腹腔注射、静脉注射、肌肉注射、皮下注射等途径染毒。大鼠和小鼠经尾静脉注射，兔则经耳静脉注射。 实验动物生物材料的采集和制备 毒理学研究中，常常需要采集动物的血液、尿液或组织，测定外源化学物或其代谢物的浓度。因此，生物材料的采集和制备是毒理学研究重要的基本操作技术。 1．大、小鼠采血 （1）鼠尾采血。 适用于用血量较少的试验。固定动物后，将鼠尾浸入45~50℃温水，使尾静脉充血，擦干，用酒精棉球消毒。将尾尖剪去约2~3mm, 拭去第一滴血，用血色素吸管（吸管内加抗凝剂 （2）断头采血。操作者一手握住动物，另一手持剪刀或断头钳快速断头，倒立动物将血液滴入容器，注意防止断毛落入容器中。用于大鼠、小鼠。 （3）摘眼球采血。动物倒立，使眼球外突充血，用小镊迅速摘掉眼球，将血液滴入事先备好的容器内。此法用于鼠类大量采血，仅使用一次。 实验动物的处死方法 1. 颈椎脱臼法 多用于小鼠，一手按住鼠头，另一手抓住鼠尾猛力向后拉， 使动物颈椎脱臼，立即死亡。 断头法 用于大鼠和小鼠。保定者一手按住鼠头，另一手握住背部，露出颈部，助手持大剪刀或断头器剪断颈部，使之死亡。此法不引起血浆皮质酮、儿茶酚胺升