永川豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其降糖活性研究.docVIP

永川豆豉胰蛋白酶抑制剂的分离纯化及其降糖活性研究 作者：郭瑞华， 王和平， 刘正猛， 翟丽， 吴少杰， 段姣姣，王宝 【关键词】 豆豉；,,胰蛋白酶抑制剂；,,分离纯化；,,降糖作用 　　摘要：目的从豆豉中提取胰蛋白酶抑制剂，并探讨其降血糖活性。 方法 以永川豆豉为材料，经脱脂，酸性溶液提取，硫酸铵沉淀得到胰蛋白酶抑制剂粗提物，再经Sephadex G-75凝胶层析得到纯化的胰蛋白酶抑制剂，以纯化的胰蛋白酶抑制剂给糖尿病小鼠灌胃并观察其降血糖活性。结果从豆豉里分离出的胰蛋白酶抑制剂对胰蛋白酶的抑制率为30%~40%；用抑制剂提取液给四氧嘧啶糖尿病模型小鼠连续灌胃4 d，发现其血糖值明显低于模型组；观察小鼠的胰组织病理切片，与糖尿病小鼠比较，灌胃后的小鼠胰组织明显得到修复。结论 豆豉提取液有较明显的降糖作用。 　　关键词：豆豉； 胰蛋白酶抑制剂； 分离纯化； 降糖作用 　　Purification A Trypsin Inhibitor from Lobster Sauce Produced in Yongchuan and Hypoglycemic Action of Research 　　Abstract：ObjectiveTo isolate and purify the trypsin inhibitor from Lobster sauce and investigate its hypoglycemic action.MethodsA trypsin inhibitor was purified from the lobster sauce of Yong Chuan by defatting，extraction with axidic buffer，precipitation，chromatography on Sephadex G-75， and its hypoglycemic action in mice was studied.Results A series study on lobster sauce showed that the inhibitor had inhibition activity of thirty~forty percent to trypsin. In mesoxalyl carbamide model，the blood glucose levels were reduced after four days treated with lobster sauce extracts of Yong Chuan, compared with the model group.Conclusion The trypsin inhibitor has hypoglycemic action. 　　Key words：Lobster saace； Trypsin inhibitor； Isolation and purification； Hypoglycemic action 　　蛋白酶抑制剂广泛存在于动植物和微生物中，具有抑制蛋白酶的活性的作用，能与相应的蛋白酶水解，参与体内许多重要生理过程的调节。其中胰蛋白酶抑制剂具有重要的药用价值，对于急性胰腺炎、肺气肿、出血性和败血性休克等疾病有独特的疗效［1］。蛋白酶抑制剂被认为是植物天然的自我防御体系，是植物抗病基因工程的重要目的基因来源［2］。大豆胰蛋白酶抑制剂（STI）与其它临床上广泛 应用 的胰蛋白酶抑制剂具有相似的性质，但其生理活性 研究 还没得到足够的重视。和其他胰蛋白酶抑制剂相比，大豆胰蛋白酶抑制剂具有分子量较小、免疫反应较弱、植物来源的抑制剂能避免携带动物病毒、原料来源广、价格低廉等优点，应当得到足够的重视。大豆胰蛋白酶抑制剂的种类有7~10种， 目前 研究证明主要有两种在动植物体内能抑制胰蛋白酶活力：一种为鲍曼克抑制剂(BBI),是由71个氨基酸组成的多肽，分子量为7 975，分子内有7个二硫键，另一个为库尼兹抑制剂（KSTI），分子量约2万，分子内有2个二硫键。近年来国外报道发现低浓度的BBI在动物体内对直肠癌、肝癌等多种癌症有抑制作用；另有报道大豆中微量胰蛋白酶抑制剂对于糖尿病 治疗 ，调节胰岛素失调可能有一定效果［3］，但未见有降血糖作用的详尽报道。因此，对具有强抗癌活性且毒性小的胰蛋白酶抑制剂，从豆豉中分离纯化，使其成为抗癌、治疗糖尿病及其并发症的新药用于临床，有十分积极的意义。 　　1 仪器与材料 　　DS1高速组织捣碎机（上海标本模型厂）, KDC1042离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司），722分光光度仪（上海精密 科学 仪器有限公司），AE240 电子 天平（METTLER公司