第一章-细胞培养的设施与基本条件.ppt

植物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 光照培养箱：植物材料少量培养；光照、暗箱；调湿与不可调湿；人工气候箱（全自动调温、调湿、控光） 人工气候室：模拟自然界的各种气象条件，精确控制室内的温度、光照、湿度、CO2等，在种子发芽、植物培养、组培、植保等领域应用广泛 摇床：细胞悬浮培养，常用振荡速度100 r/min 培养瓶：玻璃三角瓶、试管、光口玻璃瓶；硼硅酸盐玻璃器皿 2.1 动物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 培养箱（恒温培养箱和CO2培养箱）、显微操作仪、细胞融合仪、细胞冷冻储存器（程序化冷冻仪和液氮容器）、培养用器皿、手术器械 2.2 植物细胞工程实验室的常用仪器设备有： 光照培养箱、人工气候箱、摇床和培养瓶 第2章 清洗与消毒 离体培养的细胞对任何有害物质都十分敏感，微生物、 细胞碎片以及非营养性化学成分都可能影响细胞的生长， 对培养器皿清洗与消毒的要求极为苛刻。因此，清洗和消 毒是否彻底直接关系到细胞培养的成败。掌握清洗、消毒 知识，学会清洗、消毒方法是细胞培养工作的基本功。 洗涤液的配制 一、清洗 玻璃器皿：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗清洗后的玻璃器皿要求干净、透明、无油迹，且无任何残留物质 新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用0.5％的去污剂洗刷，再用自来水洗净，然后浸泡在1％～2％盐酸溶液中过夜（不可少于4 h），再用自来水冲洗，最后用无离子水冲洗两次，在100℃～120℃烘箱内烘干备用。 使用过玻璃器皿：先用自来水洗刷至无污物，再用合适的毛刷沾去污剂（粉）洗刷，或浸泡在0.5％的清洗剂中超声清洗（比色皿决不可超声），然后用自来水彻底洗净去污剂，用无离子水洗两次，烘干备用（计量仪器不可烘干）。清洗后器皿内外不可挂有水珠，否则重洗，若重洗后仍挂有水珠，则需用洗液浸泡数小时后（或用去污粉擦洗），重新清洗。 胶塞清洗 新购置的瓶塞带有滑石粉及杂质。 方法：先用自来水冲洗；每次用后立即置入水中浸泡，用2%NaOH （洗衣粉）煮沸10~20min；自来水冲洗后，1%稀盐酸浸泡30min， 或蒸馏水冲洗后再煮沸10~20min，晾干备用。 聚乙烯、聚丙烯等制成的塑料器皿，无毒、特殊包装优点在生物学实验中应用越来越广泛。第一次使用塑料器皿时，可先用8mol/L尿素（用浓盐酸调pH = 1）清洗，接着依次用无离子水、1 mol/L KOH和无离子水清洗，然后用10-3 mol/L EDTA 除去金属离子的污染，最后用无离子水彻底清洗，以后每次使用时，可只用0.5％的去污剂清洗，然后用自来水和无离子水洗净即可。 使用过程中，注意：防止划痕；用后及时浸泡 塑料器皿的清洗 1.1 细胞工程实验室的设置1.2 常用仪器与设备1.3 实验室的生物安全（自学） 第一章 细胞培养的设施与基本条件 预防培养细胞受到污染是细胞培养成功与否的关键 为什么？生物体内的细胞可以通过机体的代谢、调节和保护等机制而使其营养、环境、生长条件、抵抗有害因子能力等方面处于最佳状况。而体外培养的细胞由于失去了对整体的依赖性，对实验室细胞培养的设施条件和人员素质提出了较高的要求。 为了最大限度的创造既适合于细胞生长又可防治污染的环境，在培养过程中对细胞培养的设施、操作规程和检测方法等制定了严格的规范要求。 细胞工程实验室与其他一般实验室的主要区别在于，要求保持严格无菌环境，避免微生物及其他有害因子的影响。 一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。 一般来讲，它应能进行六方面的工作：无菌操作、培养、制备、清洗、消毒灭菌处理和储藏。各区最好分别设置于相连的各个房间，特别是无菌操作室最好能单独设置。如安排在一大实验室内，则无菌操作区与清洗、消毒灭菌区应分别位于两端，而培养、制备和储藏区位于此两区之间。 动物细胞工程实验室的设置 1.1 细胞工程实验室的设置 有其特殊的设置，如具有光照条件的培养室，试管苗培育所需的温室和移植驯化室等。 植物细胞工程实验室的设置 基本实验室 1.1 清洗间 根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30~50 m2。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿、用具和培养材料等。中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。准备1~2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。 还应配置落水架、干燥箱、超声波清洗器、纯水制备等。 地面应耐湿并排水良好。 超声波清洗机 电热干燥箱 纯水仪 洗瓶机 主要用于有关培养用液体、培养基母液和培养基的配制等。