乌贼墨汁多糖的提取工艺研究【文献综述】.docVIP

毕业论文文献综述 食品科学与工程 乌贼墨汁多糖的提取工艺研究 摘要：本文对动物多糖的提取，分离纯化进行了简单的描述以及简单介绍了多糖分级纯化方法——超滤法和柱层析法，同时对多糖的分析鉴定方面做了一定描述。 关键词：多糖；提取；分离纯化；分析鉴定 多糖又称为多聚糖，是一大类天然产物，由10个以上单糖通过糖苷键连接而成的聚糖，是构成生命的四大基本物质之一，广泛存在于植物、微生物、动物[1]等有机体中。多糖类物质包括：糖原(glycogen)，甲壳素(chitin)，肝素(heparin)，硫酸软骨素(chondroitin sulfate)，透明质酸(hyaluronic acid)，硫酸角质素(keratan sulfate)，酸性粘多糖(acid mucopolysaccharide)或糖胺聚糖(glycosam-inog lycan)。其中肝素、硫酸软骨素、透明质酸、硫酸角质素都属糖胺聚糖[2]。由于多糖在临床上、食品工业、发酵工业及石油工业有着广泛的应用[3]，使多糖生物资源的开发利用和研究日益活跃，成为天然药物、生物化学、生命科学的研究热点，到目前为止，已有300 多种多糖类化合物从天然产物中被分离出来[4]。本文对多糖的提取、分离和纯化、分析量和纯度等和方面的研究进展进行概括和综述。 1 多糖的提取 根据多糖的存在形式及提取部位的不同，在提取之前确定是否需要进行预处理。动物多糖的提液，通常首先要去除表面脂肪，一般将原料经粉碎后加入丙酮等脱脂，脱脂后过滤得到的残渣再用水作溶剂进行提取。如万淑莹等[5]将蚕蛹干粉经丙酮脱脂，沸水提取，乙醇沉淀分离制备多糖。多糖的提取目前常用碱解法、热水浸提法、酶解法或碱解与酶解相结合的方法、微波辅助提取法、超声波辅助提取法。如刘兴杰等[6]碱提取法从绿疣海葵等4种海洋无脊椎动物中提取酸性粘多糖。陈菊嫡等[7]用碱解法提取分离花刺参酸性粘多糖；张红岩等[8]用木瓜酶消化方法提取分离鹿茸中酸性多糖C. Maes等[9]用碱性过氧化氢提取小麦麸皮中的非淀粉多糖。唐孝礼等[10]用碱解与酶解相结合的方法提取分离黑海参酸性粘多糖。邓永智[11]等利用微波辅助提取法从海水小球藻中提取多糖。钟丹等[12]采用超声波提取牛蒡菊糖。Mysore[13]用热水浸提法提取高粱中的多糖。得到的多糖提取液大多较粘稠，可进行吸滤，也可用离心法将不溶性杂质除去，将滤液或上层清液合并(若为碱溶性多糖则需中和)。合并的多糖提取液经浓缩后，醇沉，也可加入费林氏溶液或硫酸铵或溴化十六烷基三甲基铵等，使与多糖物质结合生成不溶性络合物或盐类沉淀。然后依次用乙醇、丙酮、乙醚等洗涤，将吸干后疏松的多糖迅速转入装有五氧化二磷或氢氧化钠的真空干燥器中或于真空干燥箱中减压干燥。若沉淀的多糖为胶状或具粘着性时可直接冷冻干燥。 2 多糖的分离纯化 提取的粗多糖中常含有色素、多肽、蛋白质等杂质及无机盐类成分，因此需将其进行分离纯化。 2.1 去除蛋白 几乎所有动物多糖都与蛋白质相连，因此动物多糖的提取首要问题是在多糖不被显著降解的条件下去除结合的蛋白质。多糖与蛋白质的结合不是物理或离子结合，而是共价结合。经碱提取及蛋白酶水解的组织消化液，是组分及性质相近的多糖混合物，它们的多羟基及强电解性使其处于可溶状态，除去残留蛋白质和各种小分子将为多糖的进一步分级分离创造条件。除蛋白常用的有Sevage法、三氟三氯乙烷法、三氯醋酸法等电点沉淀法等。如佘志刚等[14]用Sevage法除蛋白制备鲍鱼多糖，吴梧桐等[15]用三氯乙酸法除蛋白制备猪胎盘脂多糖，吴红棉等[16]用等电点沉淀法除蛋白制备珠母贝糖胺聚糖。利用各种多糖的溶解度不同及电荷密度的差异进行分离，由于各种多糖结构和活性的不均一性和分子量的高分散性，分离得到单一多糖后，还可按其理化性质及生物活性进一步分离[17]。 2.2 脱色 多糖中常含有一些色素，可以根据其不同性质采取不同的方法进行脱色。常用的脱色方法有：离子交换法、氧化法、吸附法(纤维素、硅藻土、活性炭等)等。如柴向华等[18]在制备鲨鱼软骨多糖时用活性炭、白陶土进行脱色。另外，DEAE-纤维素是目前最常用的脱色剂，通过离子交换柱不仅可以达到脱色的目的，而且还可以分离多糖。 2.3 分级纯化方法 2.3.1 超滤法 超滤现是一种种重要的分离纯化实验技术，广泛用于含有小分子溶质的各种生物大分子如蛋白质、多糖、酶、核酸等的浓缩、分离和纯化。溶质或悬浮物料按大小不同而分离，比膜孔小的物质和溶剂一起透过膜，而较大的物质则被截留。在操作过程中不会改变产品的性能和活性，对不稳定产品是安全的，因而对于动物多糖这样的高分子生物活性物质来说是最适合的。Lignot等经比较证实超滤技术用于浓缩纯化硫酸软骨素的可行性，并证明孔径为0.1μm 时超滤膜分离