动物线粒体DNA提取简易流程及其优化.pdfVIP

维普资讯 生 技 术 通 讯 … LE 1ERSIN BIOTECHNOLOGY Vol． ·18N一，o．J1·JJan．·，，2007／ 095 文章编号：1009—0002(2007)01—0095—03 技术方法 动物线粒体 DNA提取简易流程及其优化 闫华超，贾少波，许恒龙，齐桂兰 聊城大学 生命科学学院，山东 聊城 252059 [摘要] 目的：研究动物线粒体 DNA(mtDNA)提取的简易流程，以提取到纯度高、结构完整的动物mtDNA。方法：采用 SDS 碱变性法，从动物的肝脏和性腺等组织中提取mtDNA，并增加了DNaseI、RNase消化步骤，以除去核DNA及 RNA的污染； 用紫外分光光度计分析mtDNA 的纯度和得率。结果：mtDNA 的得率为 0．5-0．8 g／g，DmlIT／D 值为 1．77-1．82，能满足对 mtDNA进行RFIJP分析、RAPD分析、测序分析等的要求。结论 ：改进 的动物mtDNA提取方法简便可行，值得推广。 [关键词] 动物；线粒体 DNA；分离纯化 [中图分类号] Q503 [文献标识码] B Study on Method for Isolation ofM ithoehondrialDNA in Animal YANHua-chao，JIA Shao-bo，XUHeng-long,QiGui—lan SchoolofBiology，Liaocheng University，Liaocheng252059，China [Abstract]Objective：ToestablishakindofmethodusedfortheisolationandpurificationofmitochondrialDNA(mtDNA) from anima1． M ethods： The mtDNA was isolated and purified bythe meansofSDS alkalidecomposition from liverand gonadofanimals． TheprocedureofDNaseI． RNasedigestionwasaddedofravoidingcompletelythepossiblepollution with nuclearDNA，RNA，etc．The mtDNA wasidentified by UV spectrophotometer．Results：The quality ofmtDNA ob— tainedwas0．5—0．8Pg／g，and theDmlIT／D was1．77-1．82．ThemtDNA obtainedwassuitabletobeanalyzedbyRFLP， RAPD， sequenceandotherkindsofmethods． Conclusion： Themethod established ismorequickerand simplerthan formermethods，and isworth topopularize． [Keywords] animal；mitochondrialDNA；isolationandpurification 自20世纪 60年代 Nass等通过 电镜发现线粒体 DNA(mi— (Rananigromaculata)；中华大蟾蜍 (B咖 6咖 gargarizans)。 tochondrialDNA，mtDNA)以来l】1，在其结构 、组成 、复制 、合成 、基 DNaseI、SDS、RNaseA、kDNA／HindllI等购 自华美生物工程 因表达及调控等方面已取得 了大量 的资料 。至 20世纪 80-90 公司，为 Promega公司产