固定化腈水解酶选择性氧化R扁桃腈的研究-化学工程与技术专业论文.docxVIP

重庆大学硕士学位论文中文摘要 重庆大学硕士学位论文 中文摘要 I I 摘 要 在 pH7.0 条件下利用膜分离组件处理腈水解酶粗品，并添加 0.5%蔗糖作为冻 干保护剂冻干，得到纯化的腈水解酶，其酶活为 69U。结合葡聚糖凝胶层析和 SDS电泳可知纯化的腈水解酶是分子量为 21190Da 的寡酶，该酶催化 R,S- 扁桃腈的最佳条件是：pH 9.6，酶与底物的质量比为 7:10，温度 40℃，实验发现 甲苯-水组成的两相反应大大提高了酶的催化效率，且甲苯与水最佳体积比为 1:10。添加选择性吸附 R-扁桃酸的 717 树脂有利于转移生成的 R-扁桃酸，导致转 化率的提高。 以 D155 树脂为基体，通过二环己基碳二亚胺与赖氨酸缩合，制备出 L-D155 树脂，再以 L-D155 树脂为载体，通过戊二醛分别与载体和腈水解酶形成席夫碱 制备固定化腈水解酶。固定化酶红外分析表明 D155 树脂成功地通过酰胺键接枝 了赖氨酸，N-L-D155 在 1671 cm-1 处出现的宽峰也证明腈水解酶通过席夫碱反应 被成功固定在 L-D155 上。 腈水解酶的最佳固定化条件为：戊二醛、载体游离氨基与腈水解酶三者的摩 尔比为：0.11:1:1.72×10-4，pH 5.25，该条件下制备的固定化腈水解酶活力为 10 ~ 15U，Km 值为 23.11mmol/L，偶联率为 43.2%，其热稳定性有所